COMPARATIVE LABORATORY STUDY ON THE EFFECTS OF CERTAIN TYPES OF LIPIDS ON THE CONCENTRATION OF PLASMA TOTAL CHOLESTEROL (TC) AND HIGH DENSITY LIPOPROTEIN (HDL-C) IN HAMSTER

قسم الأحياء الدقيقة – کلية الطب البيطرى

جامعة البعث - سوريا

Comparative laboratory study on the effects  of certain types of lipids on the concentration of plasma total cholesterol (TC) and high density lipoprotein (HDL-C) in hamster

(With 3 Tables and 3 Figures)

By

M. Alhelal; A. Alawad and N. Hapra

(Received at 19/8/2010)

دراسة مخبريّة مقارنة لتأثيرات بعض أنواع الدهون على منسوب الکولسترول الکلي والدهون عالية الکثافةفي مصورة الدم عند الهمستر

محمد الهلال ، عواد العواد * ، ناجح هبرة

* قسم وظائف الأعضاء – کلية الطب البيطرى – جامعة البعث

أجريت التجربة على /128/ ذکر من الهمستر السليمة صحيّاً , حيث قسّمت الحيوانات إلى أربع مجموعات , تناولت جميعها وبشکل حر العلف المخبري طيلة فترة التجربة وکانت معاملة کل مجموعة کالتالي: المجموعة الضابطة: تناولت العلف المخبري المحافظ على البقاء فقط. مجموعة السمن البلدي: تمّ تجريعها السمن البلدي بجرعة مقدارها 8غ/کغ من وزن الجسم يوميّاً. مجموعة زيت الزيتون: تمّ تجريعها زيت الزيتون بجرعة مقدارها 8غ/کغ من وزن الجسم يومياً. مجموعة زيت الزيتون + حمض الأولييک: تم تجريعها زيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10% بجرعة مقدارها 8غ/کغ من وزن الجسم يومياً. استمرت المعاملة لمدة /16/ أسبوع وترافقت بأربعة سحوبات دموية. لقد أظهرت النتائج ارتفاعاً معنويّاً في منسوب الـ HDL-C في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع مجموعة الأولييک وذلک بعد أربعة أسابيع من المعاملة ولکنّ النسبة HDL-C/TC کانت مرتفعة معنويّاً بمقدار 28% في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع السمن البلدي وزيت الزيتون. لوحظ بعد ثمانية أسابيع من المعاملة ارتفاعاً معنويّاً في منسوب HDL-C مجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع مجموعة السمن البلدي ومجموعة الأولييک , لکنّ النسبة HDL-C/TC کانت مرتفعة معنويّاً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع السمن البلدي وزيت الزيتون , واستمر هذا الارتفاع المعنوي حتى نهاية التجربة. لم يلاحظ أي ارتفاع معنوي في النسبة HDL-C/TC لمجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع السمن البلدي بعد أربعة أسابيع من المعاملة P>0.05 , لکن أصبح هذا الارتفاع معنويّاً بعد ذلک. بعد /8/ أسابيع من المعاملة لم نجد أي فرق معنوي في منسوب الکولسترول الکلي بين مجموعتي الشاهد وحمض الأولييک وکذلک الأمر بين مجموعتي السمن البلدي وزيت الزيتون. بعد /16/ أسبوع من المعاملة انخفض منسوب الکولسترول الکلي معنويّاً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع الشاهد , بينما لم يکن هناک فرقاً معنويّاً في مستوى الکولسترول الکلي بين مجموعتي السمن البلدي وزيت الزيتون.

الکلمات المفتاحية: الهمستر, TC (الکولسترول الکلي) , HDL-C (الکولسترول-HDL) النسبة HDL-C/TC , السمن البلدي , زيت الزيتون , حمض الأولييک.

SUMMARY

The experiment was applied on /128/ healthy male hamsters divided into four groups. Each group had laboratorial diet, freely, during the period of the experiment:Domestic Ghee Group were dosed domestic ghee 8g/kg of the body weight daily; Olive Oil Group were dosed olive oil 8g/kg of the body weight; Olive Oil+ Oleic Acid Group were dosed olive oil supplemented by 10% of oleic acid 8g/kg of the body weight daily andControl Group which had laboratorial diet that made maintenance ration. Four blood samples were collected during the experiment for 16 weeks. The results showed a significant increase (P=0.0002) of the HDL-C concentration in the domestic ghee group in comparison with the group treated with oleic acid in four weeks of treatment, but HDL-C/TC ratio was significantly increased (P=0.0000) approximately 28% for the group treated with oleic acid in comparison with the groups of domestic ghee and olive oil. There was a significant increase in concentration of HDL-C olive oil group in comparison with the group treated with oleic acid and domestic ghee group in /8/ weeks, but HDL-C/TC ratio was significantly increased (P=0.0000) in the group treated with oleic acid in comparison with the groups of domestic ghee and olive oil. This significant increase remained in /12/ and /16/ weeks of treatment. There was no significant increase (P>0.05) in HDL-C/TC ratio of olive oil group in comparison with domestic ghee group in /4/ weeks of treatment, but this increase became significant (P=0.0000) after that. There was no significant difference (P>0.05) in TC concentration between the control and oleic acid groups and also domestic ghee and olive oil groups (P>0.05) in /8/ weeks of treatment. At /16/ weeks of treatment, TC concentration of oleic acid group decreased significantly (P=0.0000) in comparison with control group, while there was no significant difference (P>0.05) between the domestic ghee and olive oil groups.                                                                                                 

Key words: Hamster, (HDL-C) HDL-Cholesterol, (TC) Total Cholesterol,    HDL-C/TC, domestic ghee, olive oil, oleic acid.

Introduction

المقدمــة

تعد الشحميات إحدى المرکبات العضوية الأساسية في الجسم الحي وذلک لدورها الفسيولوجي الکبير وکونها مصدراً هاماً من مصادر الطاقة. فبعد تناول الدهون تتم عملية الحلمأة بواسطة أنزيم الليباز إلى حموض دسمة وأحاديات الغليسيريد , وبعد امتصاص هذه الأخيرة إلى الخلايا المخاطية للأمعاء يعاد في الهيولا تصنيع الغليسيريدات الثلاثية مرة أخرى ويتشکل ما يعرف باسم الدقائق الکيلوسية (Chylomicrons) , وهي عبارة عن قطيرات دهنية مجهرية کروية تتشکل أساساً من ثلاثيات الغليسيريد مع جزء صغير من الشحميات الفسفورية وأسترات الکولسترول وکلها محاطة بجزيئات بروتينية . وهکذا يتم نقل الشحميات في المصورة على هذه الهيئة من المعقدات والتي تسمى بالبروتينات الشحمية (Lipoprotein) , والتي تتشکل من نواة من شحميات کارهة للماء محاطة بغلاف بروتيني نوعي جداً يعرف باسم البروتين الصميمي (Apoprotein). وقد حددت هوية عدد لا بأس من البروتينات الشحمية , من بينها الدهون عالية الکثافة , الدهون منخفضة الکثافة , الدهون منخفضة الکثافة جداً (HDL وLDL وVLDL ) (العواد ,2005 ) . يقوم الـ HDL  بنقل الکولسترول من مختلف الأعضاء إلى الکبد ليستقلب ويطرح خارج الجسم (العواد, 2005). تشير المعطيات الإکلينيکية إلى أنّ فرط کولسترول الدم هو عامل الخطورة الأساسي في حدوث الأمراض القلبية الوعائية عند الإنسان , کما أصبحت الأمراض القلبية الوعائية المسبب رقم واحد للموت عند الإنسان في الولايات المتحدة الأمريکية منذ عام 1990 (Rosamond et al., 2008). في الدراسة المقدمة من قبل (Smith et al .,2004) تبين بأنّ الأمراض القلبية الوعائية سبب أساسي لوفاة ما يقارب /17/ مليون شخص سنويّاً , کما أنّ المستويات المرتفعة للـLDL-C والشحوم الثلاثية في بلازما الدم بالمقارنة مع المستويات المنخفضة للـHDL-C مترابطة مع زيادة خطورة أمراض القلب التاجية. تعتبر الأغذية الغنية بالأحماض الدسمة المشبعة عامل الخطورة الأساسي لفرط شحوم الدم في المجتمعات المترفة Nielsen et al., 1995)). يعتبر فرط کولسترول الدم السبب الرئيسي للتصلب العصيدي کما أنه المسؤول عن القسم الأکبر من الأمـراض القلبيـة الوعائيـة والوفـاه في البلـدان الغربيـة , کما يوصى بإنقاص مستـوى الأحمـاض الدسمـة المشبعـة فـي الغـذاء في هذه المجتمعـات (Carleton et al., 1991). بيّن  White et al., 1997; Bennett et al., 1995; Sessions and Salter, 1994)          Salter et al., 1998; ) بأن الهمستر السوري الذهبي ذو أهمية وفائدة کبيرة في دراسة استجابة البروتينات الشحمية للتغذية على الکولسترول والدهون. في الدراسة المقدمة من قبل (Mangiapane etal., 1999) والتي أجريت على الهمستر السوري الذهبي أحدثت العليقة المضاف لها (زيت جوز الهند بنسبة 150غ/کغ عليقة والکولسترول بنسبة 30غ/کغ عليقة) آفة في الأبهر الصاعد والقوس الأبهرية وذلک بعد أربعة أسابيع من التغذية , وازداد تطور الآفة عندما استمرت التغذية لمدة /8 /أسابيع , کما بيّنت هذه الدراسة أنّ إزالة الکولسترول من هذه العليقة أوقف تطور الآفة. لقد أثبت (Perona et al., 2003) انخفاض الکولسترول الکلي عند الإنسان بعد استهلاک VOO1 (زيت الزيتون البکر المضاف له حمض الأولييک). أکدّ     (Kris-Etherton and  Shaomei.,1997) بأنّ الأغذية الحاوية على الأحماض الدسمة غير المشبعة وحيدة الرابطة المضاعفة کحمض الأولييک لها تأثير مخفّض لکولسترول الدم. بيّن2006)  EL-beshbishy et al .,) بأنّ التجريع الفموي للکولسترول 2% وزيت جوز الهند 25% لذکور جرذان (Wister) لمدة /21/ يوم أحدث زيادة معنوية في ترکيز الکولسترول الکلي في بلازما الدم قدرها /303%/ بالمقارنة مع الشاهد الطبيعي. إنّ الدراسات حول تأثير التغذية على ترکيز الـTC و الـ HDL-C مازالت قليلة , يتضح أحياناً تضارب في الآراء حول تأثير الزيوت والشحوم على مکونات الدم من الليبيدات والليبيدات البروتينية ونظراً لأهمية نتائج هذا البحث في مجال صحة الإنسان والوقاية من الأمراض القلبية والوعائية فإننا نجد أنفسنا أمام الأهداف التالية: دراسة محتوى المصورة الدموية عند حيوانات الهمستر السليمة من  الـ TC والـHDL-C  (مجموعة الشاهد) وکذلک دراسة محتواها عند حيوانات الهمستر السليمة من المعيارين السابقين بعد تناول زيت الزيتون والسمن البلدي وکذلک زيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10%.

Materials and methods

مواد وطرائق البحث

حيوانات التجربة والتغذية: شملت الدراسة /128/  همستراً جميعها کانت من الذکور السليمة صحيّاً , حيث تراوح وزن الذکر الواحد من /125-150/غ , کما تراوح عمر الذکر الواحد /20-22/ أسبوعاً . قسّمت هذه الحيوانات عشوائياً إلى أربع مجموعات , حيث شملت کل مجموعة /32/ همستراً , وکان نظام التربية منفصلاً, حيث وضع کل همستر بمفرده , وکانت درجة الحرارة ضمن الحظيرة 28 درجة مئوية وطبق نظام (12 ساعة ضوء + 12 ساعة ظلام) بحسب (Martinez et al,. 2004). غذيّت المجموعات الأربعة على الطعام المخبري (علف دواجن محبب مرحلة ثانية لا تتجاوز نسبة الدهن فيه 3%) , ترکت الحيوانات لمدة /15/ يوم  بهدف التأقلم على هذا الوضع بحسب Jain et al ., 2008)). بعد انتهاء فترة التأقلم تم إطلاق التجربة وکانت تسمية ومعاملة کل مجموعة کما يلي: المجموعة الأولى (الشاهد) تتناول الطعام المخبري فقط وبشکل حر, في حين تناولت المجموعة الثانية (مجموعة السمن البلدي) الطعام المخبري بشکل حر بالإضافة لتجريع السمن البلدي لکل همستر بجرعة مقدارها 8غ/کغ من وزن الجسم يومياً بأداة خاصة تضمن وصول الجرعة کاملةً إلى التجويف الهضمي لکل همستر. وعوملت المجموعة الثالثة (مجموعة زيت الزيتون) نفس معاملة المجموعة السابقة لکن الدهن المجرّع هو زيت الزيتون. وکذلک المجموعة الرابعة (مجموعة زيت الزيتون+حمض الأولييک) لکنّ الدهن المجرّع هو زيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10%.

جمع عينات الدم والقياسات الدموية

جمع العينات الدموية: تم سحب الدم عن طريق ثقب الجيب الخلف الحجاجي بواسطة أنابيب شعرية مطلية بمانع تخثر (الهيبارين) بحسب (Wilson et al., 2006) وذلک بعد تصويم الحيوانات مدة 16 ساعة وتخديرها بواسطة الإيتر, حيث جمع ما يقارب 1 إلى 1.5 ميلي دم  في کل مرة , يبلغ حجـم الدم الدائر بحدود (65- 80 مليلتر دم/کغ من وزن الجسم) (Harkness and Wagner, 1995). ثفلت العينات بسرعة (3000) دورة / د ولمدة  10 دقائق وذلک بهدف الحصول على البلازما وبعد ذلک وضعت الأخيرة بأنابيب أبندروف Appenedrof tube وحفظت بدرجة حرارة /-20/ درجة مئويـة تحت الصفـر بحسب Jain et al., 2008)) لحين إجراء الاختبارات.

القياسات الدموية: لقد أنجزت الاختبارات الکيمياحيوية على عينات البلازما وذلک باستخدام جهاز Spectrophotometer)) 20GENESYS من شرکة Spectronic Unicam. تمت معايرة الکولسترول الکلي بالطرق الإنزيمية باستخدام الزمر الکيميائية المعيارية ذات الرقم      ( 11505) لشرکة BIOSYSTEMS , بحسب (Allain et al., 1974). من أجل معايرة الکولسترول- HDL بالطرق الإنزيمية استخدمنا الزمر الکيميائية المعيارية ذات الرقم (11523) لشرکة BIOSYSTEMS , تم دمج الـ VLDLو الـLDL ودعيت  الـ LDL, بعد ذلک رسبت الـLDL باستخدام: (phosphotungstate and magnesium ions) بحسب (Weingand and Daggy 1990) ومن ثم حسب ترکيز الـHDL في الطافي.

التحليلالإحصائي: تم حساب قيمة  P وذلک في کل مجموعة معاملة وفي کل مرحلة من مراحل التجربة الأربعة بطريقة تحليل التباين وحيد الاتجاه (One-Way ANOVA).

Results

النتائـج

لقد أظهرت حيوانات الهمستر  بشکل عام تحمّلاً جيّداً للتجريع الفموي اليومي للدهون المختلفة خلال مراحل التجربة الأربعة. فبعد أربعة أسابيع من المعاملة کان هناک ارتفاعاً معنويّاً في قيم الـTC في کل مجموعات الدهون الثلاثة بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة ( p<0.0002) , لکنّ الـTC لمجموعة الأولييک کان الأقل ارتفاعاً بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0001) , کان هناک انخفاضاً معنوياً في الـTC لمجموعة الأولييک بالمقارنة مع زيت الزيتون والسمن البلدي(p=0.0000) . أما بالنسبة للـHDL-C فکان هناک ارتفاعاً معنويّاً في قيمه في کل من مجموعات الدهون الثلاثة بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000), کما کانت قيمته في مجموعة زيت الزيتون مرتفعة معنويّاً بالمقارنة مع السمن البلدي (p=0.009) والأولييک (P=0.0000) , کما ارتفعت قيمته في السمن البلدي معنويّاً بالمقارنة الأولييک (p=0.0002), لکنّ النسبة HDL-C/TC کانت مرتفعة معنوياً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع السمن البلدي وزيت الزيتون والشاهد (p=0.0000), بينما لم يکن هناک فرقاً معنوياً في هذه النسبة بين مجموعة الشاهد والسمن البلدي وزيت الزيتون. بعد/8/ أسبوع من المعاملة: کان هناک ارتفاعاً معنوياً في الـTC لکل من مجموعة زيت الزيتون والسمن البلدي (p=0.0000) بالمقارنة مع الشاهد , بينما لم يکن هناک فرقاً معنوياً بين الأولييک والشاهد (p=0.422) , کذلک الأمر بالنسبة لزيت الزيتون مع السمن البلدي (p=0.703). بالنسبة للـHDL-C فکان هناک ارتفاعاً معنويّاً في قيمه في کل من مجموعات الدهون الثلاثة بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000), کما کانت قيمته في مجموعة زيت الزيتون مرتفعة معنويّاً بالمقارنة مع السمن البلدي والأولييک (P=0.0000) , وعلى خلاف المرحلة السابقة کانت قيمته في مجموعة الأولييک مرتفعة معنويّاً بالمقارنة مع السمن البلدي (p=0.0000) , ومن الجدير ذکره أن قيمة الـHDL-C في کل من مجموعتي زيت الزيتون والأولييک مرتفعة بشکل معنوي بالمقارنة مع المرحلة السابقة. أمّا النسبة HDL-C/TC فکانت مرتفعة معنوياً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع السمن البلدي وزيت الزيتون والشاهد (p=0.0000) , کما کانت هذه النسبة مرتفعة معنويّاً في مجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع مجموعتي السمن البلدي والشاهد (p=0.0000) , بينما کانت منخفضة معنويّاً في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000). بعد/12/أسبوع من المعاملة: ارتفاع معنوي في الـTC لمجموعات الدهون الثلاثة بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000), کما لوحظ ارتفاعاً معنويّاً في TC مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع مجموعة زيت الزيتون (p=0.0000) وارتفاع معنوي في TC مجموعة الأولييک بالمقارنة مع مجموعة زيت الزيتون (p=0.0001). بالنسبة للـHDL-C فکان هناک ارتفاعاً معنويّاً في قيمه في کل من مجموعتي زيت الزيتون والأولييک بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000) ,کذلک کان هناک ارتفاعاً معنويّاً  بقيمته في السمن البلدي مقارنةً مع الشاهد (p=0.0002), بينما کان هناک انخفاضاً معنويّاً بقيمته في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع زيت الزيتون والأولييک (p=0.0000), کذلک لوحظ انخفاضاً معنويّاً بقيمته في مجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع الأولييک (p=0.0000), ومن الجدير ذکره أنّ قيمة الـHDL-C في مجموعة الأولييک في هذه المرحلة مرتفعة معنويّاً بالمقارنة مع المرحلة السابقة. أمّا النسبة HDL-C/TC فکانت منخفضة بشکل معنوي في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع مجموعات الشاهد وزيت الزيتون والأولييک (p=0.0000) , بينما لوحظ ارتفاعاً معنويّاً في هذه النسبة في کل من مجموعة زيت الزيتون والأولييک (p=0.0000) بالمقارنة مع الشاهد , کذلک لوحظ ارتفاعاً معنويّاً في هذه النسبة في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع مجموعة زيت الزيتون (p=0.0002). بعد /16/ أسبوع من المعاملة: ارتفاع معنوي في قيّم TC السمن البلدي وزيت الزيتون بالمقارنة مع الشاهد(p=0.000) , بينما کانت قيمته في مجموعة الأولييک منخفضة معنويّاً بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0000), کما لوحظ انخفاضاً معنويّاً في قيمته لمجموعة الأولييک بالمقارنة مع زيت الزيتون والسمن البلدي(p=0.0000) , بينما لم يکن هناک فرقاً معنويّاً في قيمته بين مجموعتي زيت الزيتون والسمن البلدي (p=0.625). أما بالنسبة للـHDL-C فقد لوحظ ارتفاعاً معنويّاً في قيمته في مجموعة زيت الزيتون  بالمقارنة مع الشاهد والسمن البلدي وحمض الأولييک (p=0.0000) , بينما لم يکن هناک أي فرق معنوي في قيمته بين الشاهد والسمن البلدي (p=0.74), لوحظ ارتفاعاً معنويّاً في قيمته في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع الشاهد (p=0.0002). أمّا النسبة HDL-C/TC فکانت منخفضة بشکل معنوي في السمن البلدي بالمقارنة مع الشاهد وزيت الزيتون والأولييک (p=0.0000), وکان هناک ارتفاعاً معنويّاً في هذه النسبة في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع مجموعة زيت الزيتون.

الجدول رقم 1:

تأثير تناول السمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10% على ترکيز الـ(TC) الکولسترول الکلي في بلازما الدم عند الهمستر خلال مراحل التجربة الأربعة.

تشير الاختلافات في الأحرف الإنکليزية إلى وجود فروقات معنوية حيث p<05.0  وذلک ضمن العمود الواحد, (n=8) .

الجدول رقم 2:

تأثير تناول السمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10% على ترکيز (HDL-C) الکولسترول-HDL في بلازما الدم عند الهمستر خلال مراحل التجربة الأربعة.

تشير الاختلافات في الأحرف الإنکليزية إلى وجود فروقات معنوية حيث p<05.0  وذلک ضمن العمود الواحد, (n=8) .

الجدول رقم 3:

تأثير تناول السمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10% على النسبة HDL-C/TC في بلازما الدم عند الهمستر خلال مراحل التجربة الأربعة.

تشير الاختلافات في الأحرف الإنکليزية إلى وجود فروقات معنوية حيث p<05.0  وذلک ضمن العمود الواحد, (n=8).

الشکل رقم (1):  ترکيز الـTC مقدّراً بالملغ/دل في بلازما الدم عند الهمستر في کل من مجموعات (الشاهد والسمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10%) خلال مراحل التجربة الأربعة,  تشير اختلافات الأحرف الإنکليزية ضمن کل مرحلة تغذية إلى وجود الفروق المعنوية, حيث أنّ (p<05.0 ) , (n=8).

مع تقدم العمر ارتفع منسوب الـTC لأعلى مستوى له بعد /16/ أسبوع من بداية التجربة وذلک عند الحيوانات الشاهدة. في حين أظهر السمن البلدي الارتفاع المعنوي الأکبر في المنسوب وأثبت التغيير الأعلى بعد/12/ أسبوع من بداية التجربة. ظهر الانخفاض المعنوي في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع الحيوانات الشاهدة بعد /16/ أسبوع من التجربة .

الشکل رقم (2): ترکيز الکولسترولHDL- مقدّراً بالملغ/دل في بلازما الدم عند الهمستر في کل من مجموعات (الشاهد والسمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10%) خلال مراحل التجربة الأربعة, کما تشير اختلافات الأحرف الإنکليزية ضمن کل مرحلة تغذية إلى وجود الفروق المعنوية, حيث أنّ (p<05.0 ) , (n=8).

مع تقدم العمر ارتفع منسوب الـHDL-C لأعلى مستوى له بعد /16/ أسبوع من بداية التجربة وذلک عند الحيوانات الشاهدة. في حين أظهرت مجموعة الأولييک الارتفاع المعنوي الأکبر في المنسوب وأثبت التغيير الأعلى بعد/12/ أسبوع من بداية التجربة.

الشکل رقم (3): يمثل النسبة HDL-C/TC في بلازما الدم عند الهمستر في کل من مجموعات (الشاهد والسمن البلدي وزيت الزيتون وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک بنسبة 10%) خلال مراحل التجربة الأربعة, کما تشير اختلافات الأحرف الإنکليزية ضمن کل مرحلة تغذية إلى وجود الفروق المعنوية, حيث أنّ (p<05.0 ) , (n=8).

أظهرت مجموعة الأولييک ارتفاعاً معنويّاً في النسبة HDL-C/TC بالمقارنة مع کل المجموعات وفي کل مراحل التجربة وأثبت التغيير الأعلى بعد/16/ أسبوع من بداية التجربة. في حين انخفضت هذه النسبة مع تقدم العمر في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة بعد /8/ أسبوع ولوحظ الانخفاض المعنوي الأکبر بعد /12/ أسبوع من المعاملة.

Discussion

المناقشـة

صمّمت هذه الدراسة للتقصّي عن تأثير أهم الدهون المستهلکة (السمن البلدي وزيت الزيتون) على منسوب الليبيدات البروتينية في تيّار الدم عند الهمستر, کما تضمنت فکرة جديدة يجب أن تؤخذ بعين الاعتبار في الصناعات الغذائية ألا وهي التقصي عن تأثير زيت الزيتون بعد إضافة حمض الأولييک. لقد استخدمنا الهمستر في هذا البحث , حيث تبيّن أن استخدام ذکور الهمستر أمر مفيد لدراسة استقلاب البروتينات الشحمية , وکان جليّاً المزايا التي تميزت بها هذه الحيوانات عن أصناف الحيوانات الصغيرة الأخرى وهذا الأمر متوافق ومؤيّد تماماً مع العديد من الأبحاث , حيث ذکر(Spady et al., 1993) أنّ حيوان الهمستر تميّز بحجمه الصغير وبسهولة التعامل معه وأصبح نموذج شائع الاستخدام لتأثيرات التغذية على استقلاب البروتينات الشحميّة. استنتج الباحث (Mangiapane et al., 1999) أنّ الهمستر السوري الذهبي طراز هام ومفيد لإستقلاب البروتينات الشحمية ودراسة تطور وانحسار التصلب العصيدي عند الإنسان, کما أنّ دراسات عديدة استخدمت ذريات متعددة من الهمستر ومجالات غذائية متداخلة وکان الهدف منها إنجاز حالة التصلب العصيدي , لقد أعيقت دراسات مفصّلة عن انحسار التصلب العصيدي بشکل متکرر بسبب طراز الحيوان المختار وطول فترة التجربة المطلوبة. استمرت مدة المعاملة في البحث الحالى /16/ أسبوع وتوافق هذا الأمر جزئيّاً وکلياً مع العديد من الدراسات , حيث استمـرت الدراسـة المقدمة من قبل (Mangiapane etal., 1999) على ذکور الهمستر السـوري الذهبـي  لمدة /4/ أسابيع , في بحث آخـر من قبل (Nicolosi et al., 2004) باستخدام ذکور الهمستر السوري الذهبي استمرت الدراسة لمدة /12/ أسبوع, وفي البحث المقدم من قبل  (Wilson et al., 2004) استمرت التجربة على ذکور الهمستر السوري الذهبي  مدة /8/ أسابيع. إنّ هناک قلّة في الأبحاث المجراة عن تأثير زيادة نسبة حمض الأولييک في زيت الزيتون على مکونات الدم من الليبيدات والليبيدات البروتينية عند الإنسان, وإن هذه الأبحاث قد لا تعطي نتائج دقيقة في هذا المجال بسبب التداخلات الغذائية الحاصلة للمرکبات العضوية الأساسية حيث يمکن استحداث الکولسترول من مصادر غير دهنية وهذا الأمر سينعکس سلباً على دقة النتائج, کذلک الأمر فإن الأبحاث التي درست وبدقة تأثير زيادة نسبة حمض الأولييک في زيت الزيتون على مکونات الدم من الليبيدات البروتينية عند حيوانات التجربة التي تم ضبط غذائها وبدقة قليلة جداً. ترتبط تأثيرات الدهون المختلفة على مکونات الدم المدروسة في البحث الحالى مع محتوياتها المختلفة من الأحماض الدسمة المشبعة والغير مشبعة , حيث بات معروفاً أنّ التغذية على الأحماض الدسمة تلعب دوّراً هامّاً في تطور محتوى الدهون في تيار الدم (Sheril et al., 2009). ومن المعلوم أن زيت الزيتون يحوي نسبة مرتفعة من حمض الأولييک (حمض دسم غير مشبع وحيد الرابطة المضاعفة), حيث بيّن (Kris-Etherton and Shaomei., 1997) بأنّ الأغذية الحاوية على الأحماض الدسمة غير المشبعة وحيدة الرابطة المضاعفة کحمض الأولييک لها تأثير مخفّض لکولسترول الدم , والنتائج التي توصلت لها الدراسة الحالية تؤکد ذلک. لقد کان واضحاً في هذه التجربة التأثير الإيجابي للـ MUFA (أحماض دسمة غير مشبعة وحيدة الرابطة المضاعفة) الموجودة بنسبة عالية في زيت الزيتون على ترکيز الـHDL-C , حيث سبب زيت الزيتون ارتفاعاً معنويّاً في قيمة الـ HDL-C بالمقارنة مع السمن البلدي وزيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک وذلک في أغلب مراحل التجربة , لکنّ الکولسترول الکلي کان متقارباً في مجموعتي السمن البلدي وزيت الزيتون في أغلب مراحل التجربة بل أکثر من ذلک حيث کانت قيمته أحياناً مرتفعة معنويّاً في مجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع السمن البلدي. بدأ ظهور تأثير إضافة حمض الأولييک لزيت الزيتون في المرحلة الأولى من التجربة حيث کان منسوب  الـTC منخفضاً معنويّاً في مجموعة الأولييک بنسبة 36% بالمقارنة مع زيت الزيتون وبقي هذا المنسوب منخفضاً معنويّاً في أغلب مراحل التجربة. کل ما سبق يبين أنه لا يمکن الحکم على نتائج هذا البحث من خلال زاوية واحدة أو من خلال حساب قيمة الـ TC لوحدها أو قيمة الـHDL-C فقط بل لابد من اللجوء لمعيار آخر يحسم النتائج بدقة , ومن هنا تأتي أهميّة حساب النسبةHDL-C/TC  حيث کانت مرتفعة معنويّاً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع زيت الزيتون والسمن البلدي وکذلک الشاهد في کل مراحل التجربة , ولهذا الأمر دلالة کبيرة تصب في سلامة القلب والأوعية الدموية , بينما لم يکن هناک فرقاً معنويّاً في هذه النسبة بين زيت الزيتون والسمن البلدي في المرحلة الأولى من التجربة , کما بدأت النسبة HDL-C/TC تنخفض معنويّاً في مجموعة السمن البلدي بالمقارنة مع زيت الزيتون والشاهد بدءاً من المرحلة الثانية من التجربة وحتى المرحلة الرابعة وهذا الأمر يظهر خطورة السمن البلدي على الأوعية الدموية. إن حساب النسبة HDL-C/TC أو النسبة TC/HDL-C له أهمية کبيرة , حيث ذکر (Kinosian et al., 1994) بأنّ نسبة الـTC إلى الـHDL-C هي أفضل مقياس لتحديد خطورة الأمراض القلبية الوعائية من حساب الـLDL-C. لم تتطابق نتائج بحثنا هذا مع ما جاء به (Wilson et al., 2004) من حيث منسوب الـHDL-C عند الهمستر السوري الذهبي حيث بيّن الباحث عدم وجود فروقات معنوية في ترکيز الـ HDL-C بين مجموعة زيت الزيتون ومجموعة زيت جوز الهند, لکن کان هناک انخفاضاً معنويّاً في النسبة TC/HDL-C مقداره 23% في مجموعة زيت الزيتون بالمقارنة مع مجموعة زيت جوز الهند , حيث تطابقت نتائج دراستنا مع هذه الحقيقة الأخيرة التي بيّنت ضرورة وأهمية حساب النسبة HDL-C/TC أو النسبة  TC/HDL-C. کما توافقت نتائج هذه الدراسة مع ما جاء به (et al., 2009 Tzang) حيث استنتج الأخير وشرکاه ارتفاعاً معنوياً في کولسترول الدم (TC) في کل من مجموعتي الزبدة وجوز الهند بالمقارنة مع زيت بذر الکتان وکذلک ارتفاعاً معنوياً في ترکيز الـHDL-C  في مجموعة زيت جوز الهند بالمقارنة مع مجموعة زيت بذر الکتان وذلک بعد /3/ أسابيع من المعاملة عند الهمستر السوري الذهبي , لکنّ النسبةHDL-C/TC  کانت مرتفعة معنويّاً في مجموعة زيت بذر الکتان بالمقارنة مع مثيلتها في کل من مجموعة الزبدة وزيت جوز الهند (وهذا الأمر يؤکد من جديد ضرورة حساب النسبة HDL-C/TC في حسم نتائج أي دراسة تتعلق بالکولسترول الکلي وأقسامه). إنّ دراسات عديدة بيّنت أنّ القوت الدهني المحتوي على أحماض دسمـة مشبعة ذات السلسلـة 12:0 –16:0 يزيـد من منسـوب الکولستـرول الکلـي (1997) Kris-Etherton and Shaomei  ولقد تطابقت نتائج دراستنا (من حيث السمن البلدي) مع ما أقرّه الباحثان السابقان. بيّن (Mata et al., 1992) أنّ الأغذية المحتوية على زيت الزيتون کان لها تأثير مخفّض للکولسترول الکلي بدون انخفاض الـ C-HDL من خلال الدراسة التي أجريت على رجال ونساء أصحّاء , لم تتطابق نتائج دراستنا مع هذه الدراسة حيث لم ينخفض في دراستنا مستوى الکولسترول الکلي في مجموعة زيت الزيتون. من جهة أخرى توافقت نتائج دراستنا مع ما أثبته (Acı´n et al., 2007) من حيث أنّ العليقة المضاف لها زيت الزيتون المثالي بنسبة 10% أحدثت زيادة معنوية في الکولسترول الکلي, وتخالفت معها من نقطة الزيادة الغير معنوية في منسوب الـ HDL-C في بلازما الدم بالمقارنة مع الفئران التي تناولت العليقة الشاهدة وذلک بعد /11/ أسبوع من المعاملة. يعود الارتفاع المعنوي الواضح في ترکيز الـTC في بلازما دم الهمستر المعامل بالسمن البلدي بالمقارنة مع باقي الدهون المستخدمة في دراستنا للنسبة الکبيرة للأحماض الدسمة المشبعة الموجودة في السمن البلدي , الأمر الذي أدى إلى انخفاض في مستقبلات الـLDL-C وتراجع القدرة على تقويض الکولسترول وعزله خارج الجسم. عزى الباحث (Mustad et al., 1997) المستويات المرتفعة لترکيز الـLDL-C  في بلازما دم الجرذان المغذاة على عليقة فرط الکولسترول إلى الخسارة المنتظمة في مستقبلات الـLDL  , وذلک بسبب زيادة ترکيز الکولسترول والأحماض الدسمة الموجودة في العليقة. لقد کان واضحاً في الدراسة الحالية التأثير المفيد والهام الذي أحدثته زيادة نسبة حمض الأولييک في زيت الزيتون على ترکيز الـTC والـHDL-C وبالتالي على النسبة HDL-C/TC وذلک بالمقارنة مع زيت الزيتون العادي وظهر التأثير الأعظمي والهام في نهاية التجربة عندما انخفض الـTC معنويّاً في مجموعة الأولييک بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة وهذا الأمر له أهمية کبيرة وبخاصة أنه يحدث مع تقدم عمر الهمستر. توافقت نتائج البحث الحالى مع الدراسة التي أجراها (Perona et al., 2003) والذي أقرّ بانخفاض الکولسترول الکلي عند الإنسان بعد استهلاک زيت الزيتون البکر المضاف له حمض الأولييک , فسّر ذلک من خلال انخفاض مستوى الکولسترول في جزيئات الـVLDL , حيث يشتق من الأخيرة الـ LDL الحاوي على ترکيز کبير من الکولسترول المؤستر. ومن المعـروف بشکل جيّد أنّ جزيئـات الـ LDL البلازمية تستمد أساساً من تحلل الشحوم داخل الأوعية الدموية ومن إعادة بناء الـ VLDL في الکبد (Packard and Shepherd 1998) , حيث أشارت براهين عديدة إلى أنّ الترکيب والخواص الإستقلابية للـ LDL مرتبطة بشکل خالص بجوهر سابقتها الـ VLDL (Guerin et al., 2000). نستخلص من ذلک إنّ زيادة نسبة حمض الأولييک قد أحدثت انخفاضاً في الکولسترول المؤستر الداخل في ترکيب الـ VLDL والذي بدوره يعتبر الأساس في عملية بناء الـLDL , وعليه انخفاض منسوب الـTC. قد يفسّر ارتفاع منسوب الـHDL-C ومنه زيادة النسبة HDL-C/TC بعد تناول زيت الزيتون المضاف له حمض الأولييک في دراستنا هذه من خلال زيادة عدد مستقبلات الـLDL الأمر الذي يقود إلى زيادة تقويض الـLDL وانخفاض منسوبه في تيار الدم وبالتالي ارتفاع منسوب الـHDL-C . وأخيراً نشير بأن هناک من ذکر بأنّ سبب اعتبار الأحماض الدسمة الغير مشبعة من العوامل الخافضة لکولسترول الدم مازال مجهولاً. من جهة أخرى هناک تفسيرات عديدة من خلال الأبحاث العالمية حول سبب اعتبار الأحماض الدسمة الغير مشبعة من العوامل الخافضة لکولسترول الدم , منها دور هذه الحموض في تنشيط إفراغ الکولسترول في الأمعاء وکذلک تنشيطها لأکسدة هذا المرکب عند تحويله لحموض صفراوية ومن المحتمل أيضاً السرعة الکبيرة لإستقلاب أستيرات الکولسترول من قبل الکبد وبعض النسج الأخرى وهذا الأمر يعزز عمليتي دوران وإفراغ هذه الأستيرات.

Conclusions

الاستنتاجات

1 - بيّنت هذه الدراسة أنّ زيادة نسبة حمض الأولييک في زيت الزيتون هو عامل هام وإيجابي , وعليه فإنّ زيت الزيتون الغني بحمض الأولييک أفضل من زيت الزيتون العادي , وهو عامل أساسي في زيادة النسبة HDL-C/TC وبالتالي الوقاية من التصلب العصيدي والأمراض القلبية ذات المنشأ الغذائي.

2 - أحدث السمن البلدي تأثيراً خطيراً على مکونات الدم من الليبيدات البروتينية وسبب انخفاضاً کبيراً في النسبة HDL-C/TC , وهذا الانخفاض ناتج عن زيادة منسوب الکولسترول الکلي نتيجة لزيادة الـLDL-C  وعليه فإن السمن البلدي عامل مقترح وأساسي في حدوث التصلب العصيدي وتضيق الشرايين والسکتات القلبية.

3 - بيّنت هذه الدراسة أهمية عدم الاکتفاء بقياس منسوب الکولسترول الکلي فقط لتقدير سلامة القلب والأوعية الدموية بل لابد من تقدير منسوب الـHDL-C ومن ثم حساب النسبة HDL-C/TC

4 - أظهر الهمستر تحمّلاً کبيراً لجرعات الدهون المتناولة لفترات طويلة ولذلک فهو طراز مفيد وهام کحيوان تجربة في اختبارات التغذية واستقلاب البروتينات الشحمية.

5 - يمکن الاستفادة  من هذه الدراسة في الوقاية من الأمراض الوعائية والتصلب العصيدي عند الإنسان , حيث يحتاج هذا الموضوع لمتابعة الدراسة والبحث.

References

المراجع

المراجع العربية

1 - العواد , عواد (2005) : الکيمياء الحيوية - منشورات جامعة البعث - کلية الطب البيطري.

المراجع الأجنبية

Acı´n, S.; Navarro, M.A.; Perona, J.S.; Mainar, J.M.; Surra, J.C.; Mario A.; Guzma´n, R.C.; Arnal, C.; Orman, I.; Segovia, J.C.O. and Ruiz-Gutierrez, V. (2007): Olive oil preparation determines the atherosclerotic protection in apolipoprotein E knockout miceJournal of Nutritional Biochemistry, 18: 418– 424.

Allain, C.C.; Poon, L.S. and Chen, C.S.G., et al. (1974): Enzymatic determination of total serum cholesterol. Clin Chem, 20: 470–5.

Bennett, A.J.; Billett, M.A.; Salter, A.M.; Mangiapane, E.H.; Bruce, J.S.; Anderton, K.L.; Marenah, C.B.; Lawson, N. and White, D.A. (1995): Modulation of hepatic lipoprotein B, 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl- CoA reductase and low density lipoprotein receptor mRNA and plasma lipoprotein concentrations by defined dietary fats. Biochemical Journal, 311: 167–173.

Carleton, R.A.; Dwyer, J.; Finberg, L.; Goodman, D.S.; Grundy, S.M.; Havas, S.; Hunter, G.T.; Kritchevsky, D.; Laver, R.M.; Luepker, R.V.; Ramirez, A.G.; Horn, L.V.; Stason, W.B. and Stokes, J. (1991): Report on the expert panel on population strategies for blood cholesterol reduction. A statement from the National Cholesterol Education Program, National Heart, Lung, and Blood Institute, National Institutes of Health. Circulation, 83: 2154-2232.

El-Beshbishy, H.A.; Singab, A.N.B.; Sinkkonen, J. and Pihlaja, K. (2006): Hypolipidemic and antioxidant effects of Morus alba L. (Egyptian mulberry) root bark fractions supplementation in cholesterol-fed rats. Life Sciences, 78: 2724–2733.

Guerin, M.; Lassel, T.S.; Le Goff, W.; Farnier, M. and Chapman, M.J. (2000): Action of atorvastatin in combined hyperlipidemia: preferential reduction of cholesteryl ester transfer from HDL to VLDL1 particles. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 20: 189.

Harkness, J.E. and Wagner, E. (1995): The biology and medicine of rabbits and rodents. 4th ed. Baltimore.

Jain, D.; Ebine, N.; Jia, X.; Kassis, A.; Marinangeli, C.; Fortin, M.; Beech, R.; Kevin, B.; Robert, H.; Moreau, A.; Kubow, S. and Peter, J.H. Jones (2008): Corn fiber oil and sitostanol decrease cholesterol absorption independently of intestinal sterol transporters in hamsters. Journal of Nutritional Biochemistry, 19: 229–236.

Kinosian, B.; Glick, H. and Garland, G. (1994): Cholesterol and coronary heart disease: Predicting risks by levels and ratios. Ann Intern Med , 121: 641-647.

Kris-Etherton, P.M. and Shaomei, Y. (1997): Individual fatty acid effects on plasma lipid and lipoproteins: human studies. Am J Clin Nutr, 65: 1628-44.

Mangiapane, E.H.; Martina, A.; McAteer, G.; Benson, M. and David, A. (1999): Modulation of the regression of atherosclerosis in the hamster by dietary lipids: comparison of coconut oil and olive oil, British Journal of Nutrition, 82: 401–409.

Martinez-Flores, E.; Chang, Y.K.; Martinez-Bustos, F. and Sgarbieri, V. (2004): Effect of high fiber products on blood lipids and lipoproteins in hamsters. Nutrition Research, 24: 85–93.

Mata, P.; Alvarez-Sala, L.; Rubio, M.; Nun˜o, J. and De Oya, M. (1992): Effects of long-term monounsaturated- vs polyunsaturated-enriched diets on lipoproteins in healthy men and women. Am J Clin Nutr, 55: 846–50.

Mustad, V.A.; Etherton, T.D.; Cooper, A.D.; Mastro, A.M.; Pearson, T.A.; Jonnalagadda, S.S. and Kris-Etherton, P.M. (1997): Reducing saturated fat intake is associated with increased levels of LDL-receptors on mononuclear cells in healthy men and women. Journal of Lipid Research, 38: 459– 468.

Nicolosi, R.J.; Woolfrey, B.; Wilson, T.A.; Scollin, P.; Handelman, G. and Fisher, R. (2004): Decreased aortic early atherosclerosis and associated risk factors in hypercholesterolemic hamsters fed a high- or mid-oleic acid oil compared to a high-linoleic acid oil.Journal of Nutritional Biochemistry, 15: 540–547.

Nielsen, L.B.; Perleth-Espensen, Bbrge G.; Foged, N.E.; Kjeldsen, K. and Stender, S. (1995): Replacement of dietary saturated fat with monounsaturated fat: effect on atherogenesis in cholesterol-fed rabbits clamped at the same plasma cholesterol level.British Journal of Nutrition, 14:509-521.

Packard, C.J. and Shepherd, J. (1998): Regulation of VLDL production in man: implications for coronary heart disease (CHD). In: Jacotot B, Mathe D, Fruchart J-C, eds. Atherosclerosis, Vol XI. Singapore: Elsevier Science, 789.

Perona, J.S.; Can˜izares, J.; Montero, E.; Sa´nchez-Domı, J.M. and Ruiz-Gutierrez, V. (2003): Plasma lipid modifications in elderly people after administration of two virgin olive oils of the same variety with different triacylglycerol composition, 89: 819.

Rosamond, W.; Flegal, K.; Furie, K.; Go, A.; Greenlund, K. and Haase, N. et al. (2008): Heart disease and stroke statistics. (2008): update: A report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation, 117: 25–146.

Salter, A.M.; Mangiapane, E.H.; Bennett, A.J.; Bruce, J.S.; Bilett, M.A.; Anderton, K.L.; Marenah, C.B.; Lawson, N. and White, D.A. (1998): The effect of different dietary fatty acids on lipoprotein metabolism: concentration-dependent effects of diets enriched in oleic, myristic, palmitic and stearic acids. British Journal of Nutrition, 79: 195–202.

Sessions, V.A. and Salter, A.M. (1994): The effects of different dietary fats and cholesterol on serum lipoprotein concentrations in hamsters. Biochimica et Biophysica Acta, 1211: 207–214.   

Sheril, A.; Jeyakumar, S.M.; Jayashree, T.; Giridharan, N.V. and Vajreswari, A. (2009): Impact of feeding polyunsaturated fatty acids on cholesterol metabolism of dyslipidemic obese rats of WNIN/GR-Ob strain. Atherosclerosis, 204: 136–140.

Smith, J.R.; Jackson, S.C.; Pearson, R.; Fuster, T.A.; Yusuf, V.; Faergeman, S.; Wood, O.; Alderman, D.A.; Horgan, M.; Home, J.; Hunn, P. and Grundy, M.S.M. (2004): Principles for national and regional guidelines on cardiovascular disease prevention:                       a scientific statement from the World Heart and Stroke Forum. Circulation, 109: 3112–3121.

Spady, D.K.; Woollett, L.A. and Dietschy, J.M. (1993): Regulation of plasma LDL-cholesterol by dietary cholesterol and fatty acids.Annual Reviews of Nutrition,13: 355–381.

Tzang; Bor-Show.; Yang; Shun-Fa.; Fu, Shih-Guei.; Yang, Hui-Chun.; Sun, Hai-Lun. and Chen, Yi-Chen. (2009): Effects of dietary flaxseed oil on cholesterol metabolism of hamsters. Food Chemistry, 114: 1450–1455.

Weingand, K.W. and Daggy, B.P. (1990): Quantitation of high- density lipoprotein cholesterol in plasma from hamsters by differential precipitation. Clin Chem, 36: 575.

White, D.A.; Bennett, A.J.; Billett, M.A. and Salter, A.M. (1997): Genetic determinants of plasma lipoprotein levels and their dietary response. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids, 57: 455–462.

Wilson, T.A.; Kritchevsky, D.; Kotyla, T. and Nicolosi, R.J. (2006): Structured triglycerides containing caprylic (8:0) and oleic (18:1) fatty acids reduce blood cholesterol concentrations and aortic cholesterol accumulation in hamsters. Biochimica et Biophysica Acta, 1761: 345–349.

Wilson, T.A.; Nicolosi, R.J.; Yoganathan, G.H.S.; Kotyla, T.; Orthoefer, F. and Binford, P. (2004): Comparative effects of emu and olive oil on aortic early atherosclerosis and associated risk factors in hypercholesterolemic hamsters. Nutrition Research, 24:395–406.