Faculty of Vet. Med., AL Baath University, Syria.

Serological Study On Brucellosis Of Sheep In South Syria

(With 5 Tables)

By

S. Al-Rhmoon and Y. AlYasino

(Received at 3/4/2010)

 دراسة مصلية لمرض البروسيلا في الأغنام بجنوب سوريا

سلطان الرحمون ، ياسين الياسينو

تم جمع 1115 عينة مصل دم أغنام وذلک بشکل عشوائي من القطعان المنتشرة في جنوب سورية وذلک حسب کثافة التربية حيث شملت 4 محافظات تغطي المنطقة الجنوبية من سورية وکانت على الشکل الآتي : ريف دمشق – القنيطرة – درعا - السويداء. وتم إجراء الاختبارات المصلية التشخيصية المعتمدة للکشف عن الأجسام المضادة للبروسيلا في الأغنام حيث تبين أن54  عينة أعطت تفاعلاً إيجابياً لاختبار التراص السريع(RBT) وکانت نسبة الانتشار الکلي(4.84%). بينما أعطت 46 عينة تفاعلاً إيجابياً باستخدام اختبار تثبيت المتممة(CFT) والذي يعتبر الاختبار الأهم والتأکيدي للکشف عن الأجسام المضادة للبروسيلا وکانت نسبة الانتشار الکلي (4.12 %)، وقد تمت مناقشة النتائج وفقاً لمعطيات الدراسة وبالتالي محاولة إيجاد مراقبة ناجحة لوضع خطة لمکافحة المرض والسيطرة عليه.

SUMMARY

One thousand one hundred fifteen sheep blood serum samples have been collected arbitrary from the prevailed herds in South Syria and that is    according to the breeding density which covered 4 Provinces as following: Damascus, Quoneitra, Daraa and Sueida. Diagnostic serological tests were performed to detect the brucellosis antibodies which showed that 54 samples were positive for Fast agglutination test and the entire prevalence rate was (4.84%). Whereas 46 samples were positive for the Complement Fixation Test which is considered the most important test to assure the         existence of brucellosis antibodies, and the entire rate was (4.12%). These   results were discussed according to the study data with a trial to find     successful monitoring in order to put a plan to control and eradicate this disease.

Key words: مرض البروسيلا ، الأغنام ، اختبار الروزنبغال ، اختبار تثبيت المتممه

Introduction

المقدمة

تعتبر منظمة الصحة العالمية WHO ومنظمة الأغذية والزراعةFAO ومکتـب الأوبئة الدولي OIE أن مرض البروسيلا أکثر الأمراض المشترکة انتشاراً في العالم(Anonymous 2007; Pappas et al., 2006)  ، ويصنف هذا المرض تحت قائمة مجموعة الأمراضB  حسب تصنيف مکتب الأوبئة الدولي ( .(OIE, 2000

ويعتبرهذا المرض مستوطناً في معظم بلدان الشرق الأوسط وأجزاء من أفريقيا وأوروبا وأمريکا اللاتينية ، ونوع البروسيلا التي تصيب الأغنام تسبب خسائر اقتصادية کبيرة لدى المزارعين کما تشکل خطراً کبيراً على صحة الإنسان (Corbel,1997).

وتعود أهميته لأثره الاقتصادي على الثروة الحيوانية والخسائر الاقتصادية من إجهاضات ، وانخفاض في إنتاج الحليب، والعقم، وتکلفة المعالجة والرعاية، وخطورته العالية التي يمثلها على صحة الإنسان من خلال التماس المباشر مع الحيوانات المصابة أو التعامل مع منتجات الحليب والألبان الملوثة; Corbel, 1997)  (Garin-Bastuji, et al,. 1998.

اکتشف  David Bruceمرض البروسيلا أول مرة في العالم في عام 1887 وذلک في جزيرة مالطة حيث تم عزل البکتيريا من طحال جندي کان مصاباً بالحمى وأطلق على هذه البکتيريا اسمMicrococcus melitensis  ولم يستطيع أحد أن يحدد سبب العدوى وطرق انتقاله حتى عام 1905 حيث شکل بروس فريق بحثه الذي اکتشف أن العدوى تنتقل عند تناول حليب الأغنام والماعز الطازجة ((Rhman, et al., 2006.

وقد ذکرRefai (2002) أنواع البروسيلا التي تصيب الأغنام والماعز بشکل رئيسي وهي البروسيلا المالطية Brucella melitensis ولها ثلاثة أنماط حيوية والبروسيلا الضأنيةBrucella ovis  وذکر Erdenlig (2000) , Alton et al. (1988) أن جراثيم البروسيلا سلبية الغرام ، مکورة على شکل عصيات حمراء ذات نهاية مدورة عند تلوينها بصبغة غرام أو صبغة ستامب أو زيل نيلسون المعدلة، وهي جراثيم غير متحرکة ، وغير متبوغة ، وليس لها محفظة ، وبطيئة النمو على المنابت، وتحتاج بعض العترات إلى وسط من غاز ثاني أوکسيد الکربون بين ((5% -10% وتحتاج إلى درجة حضانة37)م) لنموها، ودرجة حموضة (PH=6.6-7.4) ،  کما أضاف Blasco et al. (1994) أنها تحتاج إلى منابت نوعية يضاف لها الفيتامينات والمصل والديکستروز لکي تنمو مستعمراتها بعد 3-4 أيام من زرعها على وسطBrucella agar وتکون المستعمرات صغيرة – دائرية – ملساء، وتکون خشنة بالنسبة للبروسيله الضأنية. کما أضاف ( Alton et al. (1988من الصفات البيوکيميائية للبروسيله أنها إيجابية للکاتالاز، إيجابية للأوکسيداز، إيجابية لليورياز، مرجعة للنترات، ومؤکسدة للحموض الأمينية.

ويتميز المرض عند الأغنام بالتهابات في الأعضاء التناسلية وحدوث الإجهاض و ضعـف في الإخصاب ويسـبب عند الکباش التهاب في الخصية والبربخ وحدوث عدم إخصاب (Blasco, 1992) وغالباً يسير المرض بدون أعراض عند الأغنام عدا حالات الإجهاض التي تحدث في الثلث الأخير من الحمل، کما أنه يمکن مشاهدة ولادات مبکرة والتهابات رحميـة عند الأغنام المصابة وقد يحدث التهابـات ضـرع تحت سريريـة(Corbel et al., 1978)  وقـد تـم الکشـف عن مرض البروسيلا عند الأغنـام في سوريـة لأول مـرة عام 1982 (Darwish and Ben kiraney, 2001).

أجريت عدة أبحاث ودراسات للکشف عن مرض البروسيلا في سورية وتحديد نسبة الانتشار للمرض، ولکن أکثر ما يميز هذه الأبحاث أنها ترکزت على قطعان الأبقار ومحطات التربية الحکومية بينما أغفلت قطعان الأغنام التي تعتبر من روافد الاقتصاد الوطني حيث أشارت بعض الأبحاث أن نسبة الانتشار الکلي عند الأبقار 5.6% (الترکاوي, 2004)، وأظهرت دراسة أخرى في سورية أن نسبة انتشار المرض لدى الأبقار عام 1989 کانت 2.86% (البشعان  (1991.

وأشار الباحثان Darwish and Ben kiraney (2001)  أن نسبة انتشار المرض تراوحت بين (2.59-17.48%) وذلک حسب نتائج المسح الذي أجرياه عام 1996 في محافظة دمشق، بينما أشارت منظمة الفاو أن نسبة الانتشار الکلي للمرض في سورية 5.95%FAO,2001)).

هدف البحث:Objectives of the Study

1 - معرفة مستوى الانتشار المصلي للبروسيلا عند الأغنام في المنطقة الجنوبية من سورية.

2 - وضع التوصيات الخاصة ببرامج التحکم والسيطرة على المرض وإمکانية إيجاد الحلول المناسبة.

Materials and method

مواد وطرائق البحث

جمع العينات:

أجريت هذه الدراسة في المنطقة الجنوبية من سورية حيث شملت أربعة محافظات رئيسية تغطي هذا الجزء من سورية.

حيث تم جمع عينات دم أغنام ناضجة جنسياً من الوريد الوداجي وکان عددها (1115) عينة جمعت عشوائياً بأنابيب دم معقمة ومفرغة من الهواء سعة 5-10 مل وتم نقلها ضمن حوامل بشکل مبرد وبعد وصول العينات إلى المخبر تم تثفيلها مباشرةً بواسطة مثفلة بسرعة دوران  3000دورة /د ومن ثم فصل المصل وتعبئته بأنابيب أبندروف لإجراء الاختبارات اللازمة وحفظه على درجة حرارة –20ْم.

جدول رقم (1): يوضح عدد العينات التي تم جمعها من المحافظات المدروسة

طرق التحليل المصلي:

بعد الحصول على المصل وتعبئته في أنابيب أبندروف تم إجراء أهم الاختبارات المصلية الکلاسيکية المعتمدة والمسجلة لتشخيص البروسيلا حسب مکتب الأوبئة الدولي (OIE,2000):

1 - تفاعل روز البنغال Rose Bengal(RBT) ويستخدم للکشف السريع عن الإصابة في العينة المدروسة حيث يکشف IgM فقط.

2 - تفاعل تثبيت المتممة (CFT) Complement Fixation test: ويکشف عن وجود IgG في المصل المدروس ويعتبر هذا التفاعل بالإضافة إلى تفاعل روز البنغال الأکثر حساسية ونوعية بين الاختبارات المصلية الکلاسيکية Blasco et al. (1994).

حيث تم فحص(1115) عينة مصل دم باستخدام اختبار التراص السريع (RBT) والعينات التي أعطت تفاعلاً ايجابياً تم إعادة فحصها  بإجراء اختبار تثبيت المتممة (CFT) حيـث تـم اعتبـار النتيجـة ايجابيـة من التمديـد 1/10 فمـا فـوق حسـب   Lennette and Schmidt (1979) Alton et al. (1988),.

التحليل الإحصائي:

تم إجراء التحليل الإحصائي لنتائج الدراسة باستخدام اختبار بيرسون مربع کاي Pearson's Chi Square)) لمقارنة الانتشار المصلي للبروسيلا بين مناطق الدراسة وتم استخدام برنامج التحليل الإحصائي الأمريکي (Analytical Software, 2000) النسخة الثالثة.

Results

النتائـج

أظهرت النتائج المسحية التي اعتمدت على اختبار التراص السريع (RBT) على وجود (54) عينة أعطت تفاعلاً إيجابياً من أصل (1115) عينة مفحوصة وبنسبة انتشار کلي (4.84%) ، بينما انخفض عدد الحالات التي أعطت تفاعلاً إيجابياً وبشکل ملحوظ باستخدام اختبار تثبيت المتممة CFT)) حيث تبين أن هناک (46) عينة إيجابية من أصل (1115) عينة مفحوصة وبنسبة انتشار کلي (4.12%) کما يتضح في الجدول رقم (2 ).

جدول (2): نسبة الانتشار المصلي في المحافظات المدروسة بجنوب سوريا اعتماداً على اختباري RBT, CFT.

وأظهرت النتائج المسحية للعينات المدروسة بعد إجراء اختبار تثبيت المتممة (CFT) على النعاج أن(45) عينة أعطت تفاعلاً ايجابياً من أصل (1049) عينة مفحوصة وبنسبة انتشار (4.28 %)، بينما (1) عينة واحدة فقط من الکباش أعطت تفاعلاً ايجابياً من أصل (66)عينة مفحوصة وبنسبة انتشار (1.51 %) کما يتضح في الجدول رقم (3 ).

جدول (3): نسبة الانتشار المصلي في النعاج والکباش اعتماداً على اختبار CFT

وعند إجراء اختبار تثبيت المتممة على عينات الأغنام المجهضة تبين أن (7)عينات أعطت تفاعلاً ايجابياً من أصل (27) عينة أغنام مجهضة مفحوصة وبنسبة انتشار کلي (25.92%) کما يتضح في الجدول رقم (4).

جدول (4): نسبة الانتشار المصلي في النعاج المجهضة وغير المجهضة اعتماداً على اختبار تثبيت المتممة CFT

وتم دراسة حد الثقة 95% لنسب الانتشار المصلي والخطأ المعياري بين المحافظات المدروسة کما يتضح من خلال الجدول رقم (5)

جدول (5): حد الثقة 95 % لنسبة الانتشار المصلي والخطأ المعياري بين المحافظات المدرسة

Discussion

المناقشة

مازال مرض البروسيلا من أخطر الأمراض على صحة الإنسان والتي تسبب خسائر اقتصادية کبيرة في الأغنام والماعز والحيوانات الأخرى ((Pappas et al., 2006.

 وأکدت هذه الدراسة على ايجابية المرض عند الأغنام في المحافظات الجنوبية من سورية، واعتماداً على اختبار تثبيت المتممة تراوحت نسبة الانتشار المصلي بين (%2.58- 5.72%) وبنسبة انتشار کلي (4.12%) وهذا أقل من النتائج التي أو ردتها منظمة الصحة والغذاء في سورية عام 2001 وهي 5.95%(FAO,2001). وهذه النسبة أقل بقليل من نسبة انتشار المرض عند الأغنام في مصر 4.8% (et al., 2008 Samaha).

والنسبة التي توصلنا لها في المنطقة الجنوبية من سوريا أعلى من النسبة التي توصل إليها  الباحث الرفاعي في الجزائر (2.18 %) في البحث الذي أجراه على الانتشار المصلي عند الأغنام في عام 2000 (Refai, 2000). کما لم تتوافق نسبة الانتشار في بحثنا حيث کانت أقل من النسبة التي توصل إليها الباحث مميش (6.5%) عند الأغنام و(9.7 %) عند الماعز في البحث الذي أجراه عام 2001 في المملکة العربية السعودية (Memish , 2001).

ونسبة الانتشار في هذه الدراسة لا تتوافق معDarwish and Ben kiraney (2001)  حيث کانت نسبة الانتشار الکلي عند الأغنام والماعز في سورية (2.94%) في الدراسة التي أجرياها بين 1990- 1996، وکان حجم العينات التي تم جمعها 166عينة أغنام وماعز معاً.

وکانت هناک فروق معنوية واضحة مابين ريف دمشق والقنيطـرة حيث کانت قيمـة P < 0.001 ، وهناک فروق معنوية متوسطة مابين ريف دمشق وکلاً من السويداء ودرعا حيث کانت قيمة 0.001 < P   < 0.05 ، بينما کان هناک فروق معنوية بسيطة مابين القنيطرة و کلاً من السويداء ودرعا حيث کانت قيمة P< 0.05 ، ولم يکن هناک فروق معنوية مابين السويداء ودرعا حيث کانت قيمة P >0.05 .                                                                 

وکانت نسبة الانتشار المصلي عند الإناث (4.28%) تزداد عما هي عند الذکور(1.51%) وهذا  قد يدل على أن الإناث أکثر قابلية للإصابة ، وکانت هناک فروق معنوية واضحة في نتائج الانتشار المصلي بين الذکور والإناث وهذه النتيجة تتوافق مع ما ذکره (Hussein et al. (2005 حيث أشار أن نسبة الإصابة بداء البروسيلا تکون في الإناث أعلى مما هي في الذکور ، کما يوافق ما توصل إليه (Gulaand and Kahan (2007 من أن نسبة الاصابة عند الاناث أعلى مما هي عند الذکور ، وقد يعزى السبب إلى زيادة سکر الأريتريتول في رحم الإناث الحوامل مقارنة مع مستوياته في أعضاء الجهاز التناسلي الذکري مما يجعله عاملاً مساعداً لتکاثر الجراثيم المسببة للمرض بشکل أکبر في الإناث عما هو عليه في الذکور ((Charanjeet, 2004 ، ولا تتوافـق هذه النتيجـة مع ما توصـل إليه (Cadmus, et al. (2006 حيث لم يجد فروق معنوية في نسبة انتشار المرض بين الکباش والأغنام في نيجيريا.

بينما نجد أن هناک فروق معنوية واضحة في نسبة انتشار المرض عند الأغنام المجهضة (25.92%) وبزيادة (7) مرات تقريباً عما هي عند الأغنام غير المجهضة (3.71%) ، وهذا يدل على تزامن المرض مع حدوث الإجهاض ، وهذه النتيجة لا توافق النسبة التي توصل إليها الباحثان Darwish and Ben kiraney (2001) وکانت (%19.09) في الدراسة التي أجرياها بين عامي 1990- 1996 ويعود ذلک أن البحث قد شمل الأغنام والماعز المجهضة معاً وبنسبة انتشار تراوحت بين (6.25%-56%).

Conclusions

الاستنتاجات

بناءً على هذه الدراسة والتي تؤکد على ايجابية مرض البروسيلا في قطعان الأغنام في محافظات المنطقة الجنوبية من سورية وبنسبة مرتفعة (4.12%) مقارنة مع الدول الاسکندنافية التي وصلت إلى استئصال المرض فإننا نوصي بالآتي:

إجراء مسوحات مستمرة لعينات عشوائية من الأغنام والکباش في المحافظات الجنوبية لإعطاء صورة واضحة وبشکل مستمر عن المرض.

ضرورة اعتماد برنامج ناجح للتحکم والسيطرة على المرض ، وتقييم البرنامج المتبع في وزارة الزراعة بتلقيح الأغنام بلقاح العترة Rev 1 والمستمر منذ فترة طويلة.

ضرورة التخلص الصحي من الحيوانات التي تعطي نتائج ايجابية حتى لا تبقى مصدراً لانتشار المرض لاسيما أن أعدادها لا يشکل عبء اقتصادي کبير.

References

المراجع

المراجع الأجنبية:

Alton, G.G.; Jones, L.M.; Angus, R.D. and Verger, J.M. (1988): Techniques for brucellosis laboratory. Institute National De La Recherche Agronomique, Paris, pp. 123-130.

Analytical Software (2000): Statistix, Version for windows 4.0, USA.

Anonymous. (2007): FAO, WHO, OIE, Guidelines for a Regional Brucellosis Control Programme for the Middle East.Prepared at the Workshop Of Amman, Jordan 14-17 February 1993, by Drs. Mustafa and Nicoletti, FAO Consultants, Amended at the Round-Table of Maisons-Alfort, France 21-22 September 1995.

Blasco, J.M. (1992): Diagnosis of Brucella melitensis infection small ruminants. In: Prevention of brucellosis in Mediterranean countries, ed. Plommet M, pp. 272-278. Pudoc Scientific, Wage- ningen  The Netherlands.                   

Blasco, J.M.; Garin-Bastuji, B.; M.C.M.; Gerbier, G.; Fanlo, J.;  Jimenez  De Bagues, M.P. and CAU, C. (1994): Efficacy of different rose Bengal and complement fixation antigens for the diagnosis of brucella melitensis infection in sheep and goats. Vet. Rec.,  134: 415-420. 

Cadmus, S.I.B.; Ijagbone, I.F.; Oputa, H.E.; Adesokan, H.K. and Stack, J.A. (2006): Serological Survey of Brucellosis in Livestock Animals and Workers In Abadan, Nigeria. African Journal of Biomedical Research; 9: 163-168.

Charanjeet, MS.; Katoch, RC.; Prasenjeet, D.; Rajinider, K. (2004): Application of RBPT, SAT and Avidin – Biotin serum ELISA for detecting brucellosis among livestock in himachal Pradesh. Indian J comp Microbiol Immunol Infect Dis.; 25: 15-18.  

Corbel, M.J.; Gill, K.P.W. and Thomas, E.L. (1978): Methods for the Identification of Brucella. Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, UK, ADAS, RCV22.

Corbel, M.J. (1997): Brucellosis: an overview. Emerg Infect Dis.; 3:    213-21.

Darwish, M. and Benkirance, A. (2001): Fild Investigations of Brucellosis in cattle and small ruminants in Syria, 1990-1996, Sci. teah. off. int. Epiz, 20(3), 769-775.

Erdenlig, S. and Sen, A. (2000): Isolation and biotyping of Brucella species in aborted sheep fetuses. Pendik Vet. Microbiol. (31): 31-42.

FAO (Food and Animal Oeganisation) (2001): Syrian report. Directorate of Animal Health, Damascus.

Hussein, AAA.; Sayed ASM. and El Feki, MA. (2005): Seroepidemiological study on human brucellosis in Assiut Governorate. Egypt J. Immumol; 12: 49-56. 

Garin-Bastuji, B.; Blasco, J.M.; Grayon, M. and Verger, J.M. (1998): Brucella melitensis infection in sheep: present and future. Vet Res. (29): 255–74.

Gulaand, ST. and Khan, A. (2007): Epidemiology and Epizootology of brucellosis A review. Pakistan Vet. J.; 27(3): 145-151.

Lennette, E.H. and Schmidt, N.J. (1979): Diagnostic procedures for viral and riskettsial infections. 5. Ausgabe, S. 35-42 New York.

Memish, Z. (2001): Brucellosis control in Saudi Arabia: prospects and challenges. J. Chemother., 13: 11–17.33-Anonymous, 1998. WHO Expert Committee on Brucellosis. WHO, Geneva, pp:      1-100.

OIE (Office International Epizooties) (2000): Manual of standards Diagnostic Tests and Vaccines .Section 2.3, Chapter 2.3.1.

Pappas, G.; Papadimitriou, P.; Akritidis, N.; Christouulm Tsianos EV. (2006): The new global map of human brucellosis. Lancet Infect Dis.(6): 91–9.

Rahman; Juddin, M.; Joon-Seok Chae; Brahman, M. and Islam, M.A. (2006): A short History of Brucellosis: Special Emphasis In Bangladesh Bangl. J. Vet. Med. 4(1): 01-06.

Refai, M. (2002): Incidence and control of brucellosis in the Near East region. Vet Microbiology 90. 81-110.

Samaha, H.; Al-Rowaily, M.; Khoudair, RM. and Ashourhm (2008): Multicenter study of brucellosis in Egypt. Emerg Infect Disease.

المراجع العربية:

البشعان ، منير (1991): دراسات جرثومية على البروسيلة في الأبقار في سورية. رسالة دکتوراه. جامعة البعث ، کلية الطب البيطري.

الترکاوي ، محمد علاءوطباع ، دارم والعمر ، ياسر (2004): الانتشار المصلي للبروسيلة المجهضة في المزارع الحکومية لتربية الأبقار الحلوب في سورية. مجلة جامعة البعث، المجلد29، العدد12 .ص222-237.