SEROLOGY STUDY ON ENZOOTIC ABORTION OF EWES IN NORTH AREA OF SYRIA

Department Animal Diseases,

Veterinary, College- AL-Bath University, Syria.

SEROLOGY STUDY ON ENZOOTIC ABORTION OF EWES IN NORTH AREA OF SYRIA

(With 3 Tables)

By

E. Othman; Y. ALYasino and Y. Alomar

 (Received at 20/11/2010)

دراسة مصلية عن مرض إجهاض الأغنام المستوطن في المنطقة الشمالية

في سورية

عيسى العثمان ، ياسين الياسينو ، ياسـر العمـر

أجُريت الدراسة على 418 نعجةً مجهضةً بأعمار مختلفة في 24 قطيع أغنام في 6 مناطق ضمن محافظتين. من بين 418 عينة مصل تم جمعها من أغنام مجهضة وتم اختبارها من أجل الکشف عن الأجسام المضادة للکلاميديافيلا المجهضة باستخدام اختبار الاليزا ؛ تبين أن  36 نعجة (%8.61) إيجابية مصلياَ و11 نعجة (2.63%) مشتبهة و371  نعجة (%88.75) سلبية مصلياَ. وقد وُجِدَ ايضاَ أن المرض موجود في کل المناطق التي تم جمع العينات منها وکذلک وُجِدَ في 15 قطيع من أصل 24 قطيع تم دراستها؛ أي بنسبة انتشار مصلي ايجابي لقطعان الدراسة (62.5 %) کانت فيها حيوانات إيجابية.وسجلت الدراسة أن أعلى انتشار مصلي  ايجابي في الأعمار الإنتاجية المتراوحة بين سنتين وثلاثة سنوات مقارنة مع الأعمار الإنتاجية الأخرى وهذا يثبت أن الأغنام اليافعة أکثر قابلية للإصابة مقارنة مع النعاج الفتية والمعمرة.

SUMMARY

The study was carried out on 418 aborted ewes in different ages in 24 sheep folds in 6 regions within two province (mohafazat) the study  confirmed that positive seroprevalence in 36 aborted ewes was (8.61%), 11ewes were suspected (2.63%) and 371 ewes were reported negative reaction to ELISA test (88.75%). The positive cases were reported in all study regions and the positive cases were reported in 15 fold of 24 study population  as seropositive percent (62.5%) folds level. The study reported that the higher positive seroprevalence were in productivity age range between 2 and 3 years old comparing  with other ages. This confirms that adult ewes were near susceptible animals to the infection comparing with young and old  ewes.

Key words: Enzootic abortion, Syria, serology.

Introduction

مقدمــــة

إجهاض الأغنام المستوطن enzootic abortion of ewes (EAE) أو الإجهاض الضأني المستوطن(OEA)  ovine enzootic abortion وهو أحد أهم المسببـات المرضيـة التي تسبب الإجهـاض عند الأغنـام والأبقار حيث يسبب إجهـاض الأغنام المستوطن عند الأغنام، وإجهاض الأبقار الوبائي عند الأبقار           ) (Nietfeld, 2001; Entrican, 2002.

العامل المسبب لهذا المرض هو جراثيم الکلاميديافيلا المجهضة Chlamydophila abortus التي تنتمـي الى جنـس الکلاميديـا فيلا  الذي يتبع لعائلـة الکلاميديـا Chlamydiaceae التي تتبع لرتبة الکلاميديا  Chlamydiales (Papp et al., 1994 ; Everett et al., 1999) أُعتقد سابقاً بأن النمط المصلي الأول للکلاميديا الببغائيـةC. Psittaci  هو المسؤول عن الإجهـاض عند الأغنام (Entrican et al., 2001). تتميز الکلاميديا بدورة تکاثرية فريدة ثنائية الطور تتبدل بين مرحلة العدوى خارج الخلية، ومرحلة التکاثر الخلوي المجبرة داخل الخلية، وهي غير معدية.الشکل المعدي يدعي الجسم الابتدائي (EB) صغير (300 -400) نانو متر ، يشبـــه الأبـواغ وهــو خامــل استقلابيــاً وموجــود خــارج الخلايـا (Nietfeld, 2001 ; Galiero, 2007 ; Mousa et al., 2010)  له جدار سميک (Aikten, 1993). أمـا الشکل غيـر المعـدي يدعـى الجسيـم الشبـکي (RB) وهو کبيـر الحجـم (800-1000) نانو متر ، يمثـل الطـور غيـر المعـدي ، نشيـط استقلابيـاً وهـو قـادر على التکاثـر والانقسـام داخــل الخليـة (Nietfeld, 2001 ; Galiero, 2007 ; Mousa et al., 2010)  رقيق الجدار ولا يستطيع البقاء خارج خلايا المضيف (Aikten, 2007). تعد الکلاميديا فيلا المجهضة المسبب الأبـرز للاضطرابـات التناسليـة في أغلـب البلدان المنتجة للأغنام (Aikten, 1993) وقد يصل المرض إلى المستويات الوبائية وعندها تجهض حوالي 30% من الأغنام في الأسابيع الثلاثة الأخيرة من الحمل أو تلد حملان ضعيفة وبعد الإجهاض تتطور المناعة الوقائية عند الأغنام المجهضة وفي الشکل المستوطن للمرض يمکن أن نلاحظ الإجهاضات بمعدل يتراوح بين 5-10 % من أغنام القطيع المصاب (Rodolakis et al., 1998 ; Al-Qudah et al., 2004). يصيب المرض الحيوانات في کل الأعمـار ولکـن الصغيـرة بالعمـر تتأثـر بشکل أکبر (Shewen, 1980) وينتشـر المـرض في العديـد من الدول المهتمة بتربية الأغنام ماعدا استراليا ونيوزيلندا (CFSPH, 2009) وقد سُجّـِل معـدل أنتشـار الکلاميديـا فيـلا المجهضــة عنـد الأغنــام عالميــاً بمعـدل يتــراوح بيـن 5% و 39 % (Borel et al., 2004; Al-Qudah et al., 2004; Da Silva et al., 2006)، يصيب المرض بشکل أساسي الأغنام والماعز وبشکل أقل الأبقار والخنازير والخيول والغزلان (CFSPH, 2009 ; OIE, 2009)، أيضاً أُبلِغَ عن انتقال المرض إلى النسـاء الحوامـل بعد الاتصـال مع الأغنـام المجهضـة أو الوالـدة حديثـاً (Vlahovic et al., 2006 ; Mousa et al., 2010). المصـدر الرئيسـي للعدوى في البيئـة هو المشائـم والسوائـل الجنينيـة من الحيوانـات المصابـة (Appleyard et al., 1985) حيث تبقـى الأجسـام الأوليـة معديـة لعدة أيام (Papp et al., 1994) ينتقل المرض عن طريق تناول العلف والماء الملوث بالعامل المسبب (Wilsmore et al., 1986) ، وتشير بعض التقارير إلى انتقاله عن طريق الاستنشاق (Jones and Anderson, 1988) وبالاستنـاد إلى النتائـج التجريبيـة فـإن الانتقـال التناسلي هو أقل طريق يمکن أن تحدث عن طريقه العدوى (Appleyard et al., 1985). يعتمد تطور الأعراض السريرية على وقت دخول العدوى إلى القطيع ، فإذا حدثت العدوى عند الأغنام والماعز قبل 6-5 أسابيع من الولادة  تتطور الأعراض السريرية خلال الحمل الحالي (Morgan et al., 1988)، أما إذا حدثت العـدوى خـلال الأربعـة أسابيـع الأخيـرة مـن الحمـل يمکـن أن تتطـور العدوى بشکل مستتر وتظهر الأعراض السريرية خلال الحمل المقبل (Wilsmore and Dawson, 1990). تدخل العدوى إلى القطيع المصاب عن طريق استبدال بعض الحيوانات بحيوانات مصابة مؤدية إلى عدد قليل من الإجهاضات في السنة الأولى لدخول العدوى ولکن في السنة التالية تحدث عاصفة من الإجهاضات حيث تجهض حوالي 30 % من الأغنام الحوامل (OIE, 2008). لا تظهر أي أعراض سريرية تسبق الإجهاض بالرغم من التغيرات السلوکية والاطلاقات المهبلية التي يمکن أن تلاحظ خلال 48 ساعة الأخيرة من الحمل (Entrican, 2002). يحدث الإجهاض بشکل نموذجي خلال 3-2 أسابيع الأخيرة من الحمل مؤدياً إلى ظهور حملان ميتة  ويمکن أن تولد الحملان لکن تکون ضعيفة  ولا تستطيع البقاء على قيد الحياة لأکثر من  48ساعة ويلاحظ التهاب مشيمة (OIE, 2008). الأجنة المجهضة تکون نامية بشکل جيد إشارة إلى أن الموت الجنيني کان متأخراً جداً (Williams and Donovan, 2009). يمکن أن نلاحظ بعض التغيرات المرضية کالنزف تحت الجلد في الأرجل والأوراک والرقبة والرأس عند الجنين المجهض بالکلاميديا المجهضة عند الأغنام والماعز (Sharma et al., 2008). يُتْبع الإجهاض بطرح سوائل مهبلية وسخة يمکن أن تُلاحظ  لمدة أکثر من سبعة إلى عشرة أيام (Entrican et al., 2001). عند الکباش والتيوس يمکن أن تسبب الکلاميديافيلا المجهضة التهاب مفاصل والتهاب في الحويصلة المنوية نتيجة طرح العامل المسبب مع المني (Appleyard et al., 1985). الإصابات البشرية غالباً ما تکون معتدلة وغير ملاحظة عند النساء الحوامل ولکن يمکن أن تتطور مُحدثة الإجهاض (Jorgensen, 1997). إجهاض الأغنام خلال /2-3 / أسابيع الأخيرة من الحمل والمترافقة مع التهاب المشيمة يشکل أساس مقبول من أجل التشخيص المؤقت لهذا المرض لکن ظاهرياً بعض حالات التوکسوبلازما تکون مشابهة للکلاميديا المجهضة ، وربما تشترک مسببات أخرى في التفشي الوبائي ؛ ولذلک الإجهاض والتهاب المشيمة النخري غير مميز للإجهاض الکلاميدي ويمکن أن يظهر في حالة الإصابة باللستريا والکامبيلوباکتر (Aikten, 2007)؛ لذلک تشخيص عدوى الکلاميديافيلا المجهضة يمکن أن يتم بتقنيات کشف المستضد المختلفة التي تتضمن polymerase chain reaction (PCR) والکيمياء النسيجية histochemical والصبغات المناعيةimmunological staining للمسحـات المأخـوذة مـن أنسجــة  المشيمـة أو مشتمـلات الکلاميديـا بعـد عـزل العامـل المسبـب علـى الخلايــا المزرعيـــة Rekiki et al., 2002 ; Masala et al., 2005; Da Silva et al., 2006) ;              Nietfeld, 2001). وعلى أية حال کل هذه الاختبارات تعتمد على المادة التشخيصية ذات النوعية الجيدة والمحفوظة بشکل جيد وعلى الاختصاصيين ذوي الخبرة والکفاءة العالية.

ومن ناحية أخرى يوجد العديد من الاختبارات المصلية مثل اختبار التألق المناعي immunofluorescence tests (IFATs) واختبار الاليزا ELISAs واختبار تثبيت المتممة  complement fixation test (CFT)الذي يستخدم بشکل واسع في المخابر البيطرية لتحديد الحيوانات المصابة بالکلاميديا فيلا المجهضة لکن التفاعلات الانتيجينية التصالبية بين C. abortus  and C. pecorum بالإضافة إلى بعض الجراثيـم سلبية الغرام مثل Acinetobacter يمکن أن تـؤدي إلى نتائـج إيجابية خاطئة في اختبـار تثبيـت المتممـة  (CFT) واختبـار التالـق المناعـي (IFATs) ;Travnicek et al., 2002 ; Niemczuk et al., 2005; Da Silva et al., 2006) Longbottom et al., 2002) في العام 2007 ذکـر الباحث Vretou وزمـلاؤه بـان اختبـار الاليـزا من أجـل تشخيـص الکلاميديـا فيـلا المجهضة (Pourquier, France Institute) هو أکثر نوعية وحساسية من اختبار تثبيت المتممة من أجل التشخيص المصلي لمرض إجهاض الأغنام المستوطن(Vretou et al., 2007)

ونتيجة أهمية مرض إجهاض الأغنام المستوطن وتأثيره على صحة کلٍ من الإنسان والحيوان ونتيجة ندرة البيانات الوبائية حول العدوى عند الأغنام في المنطقة الشمالية في سورية فقد کان هدف هذه الدراسة هو تقدير الانتشار المصلي للأجسام المضادة للکلاميديافيلا المجهضة عند الأغنام ومقارنة الانتشار المصلي للأجسام المضادة للکلاميديا فيلا المجهضة في کل من مناطق الدراسة بالمقارنة مع العمر الانتاجي للأغنام.    

Materials and Methods

مواد وطرائق البحث

مواد البحث Materials:

جمع العينات: Sampling collection

تم جمع 418 عينة مصل من 24 قطيع من الاغنام من المحافظتان الشماليتان في سورية (حلب والرقة). جميع العينات التي تم جمعها کانت من أغنام القطاع الخاص، والأغنام کانت بأعمار مختلفة وتخضع لنظام تربية طليق ونصف مکثف وهي من سلالة الأغنام العواس کونه السلالة السائد في سورية. الحيوانات تتغذى على الأعشاب المحلية والغذاء المرکز لکن بشکل  عشوائي. تم جمع العينات خلال الأسابيع الأربعة التي تلي الإجهاض حيث تم أخذ عينات الدم من الوريد الو داجي من الأغنام المجهضة وهي في حالة الوقوف وبعدها تم حفظ الدم بشروط صحية وتم نقله إلى المخبر لفصل المصل وحفظه بدرجة حرارة -20 °م حتى إجراء الاختبار.

مواد العمل المخبري

 استخدم مجموعة تشخيصية لاختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالأنظيم (ELISA)

Pourquier Institute  POURQUIER® ELISA CHLAMYDOPHILA. abortus serum Verification – Version P00700/06,  France

يعد هذا الاختبار هو المفضل في عمليات التقصي المصلي لأعداد کبيرة من العينات بالنسبة لمرض إجهاض الأغنام المستوطن (EAE) (OIE, 2000). ضمت المجموعة التشخيصية المواد التالية:

1- طبق الإليزاELISA  يحتوي على96  حفرة ميکروليترية مرقمة منA1 وحتى H12 مغطاة  بمستضد الکلاميديا فيلا المجهضة

2- مصل الشاهد الايجابي Positive control)) الحاوي على الأجسام المضادة النوعية للکلاميديا فيلا المجهضة.

3- مصل الشاهد السلبي Negative control)) الخالي تماماً من الأجسام المضادة النوعية للکلاميديا فيلا المجهضة.

4- محلول التمديد 4 (Dilution Buffer 4): يستخدم هذا المحلول من اجل تمديد أمصال العينات.

5- محلول التمديد 1 (Dilution Buffer 1 ): يستخدم هذا المحلول من اجل تمديد محلول المقترن.

6- محلول الغسيل: (Washing Solution) ترکيز 20 x.

7- المقترن (Conjugate): يرتبط مع معقد (الانتجين – الأضداد النوعية) والمقترن عبارة عن protein G peroxidase conjugate.

8- محلول الکاشف اللوني للأنزيم  Revelation solution 2(TMB): الذي يکشف کمية الارتباط بين محلول الاقتران المرتبط بالأنزيم ومعقد (الانتجين – الأضداد النوعية) عن طريق إظهار درجة التلوين والتي يمکن قياسها عبر قارئ الإليزا وهذا المحلول جاهز للاستخدام ولا يحتاج إلى تمديد Ready to use.

9- محلول إيقاف التفاعل (Stop Solution): يضاف بعد انتهاء فترة حضانة الکاشف اللوني للأنزيم لإيقاف وإنهاء التفاعل الحاصل ويتألـف من محلول حمض الکبريت 0,5 M ((H2SO4  0,5 M solution.

طرائق البحث Methods

ووفقاً لتعليمات الشرکة المنتجة وباختصار تم إجراء الاختبار بتوزيع 190 ميکرو ليتر من محلول التمديد رقم  4(Dilution Buffer 4) إلى کل حفرة من حفر الطبق المغطاة بمستضد الکلاميديا فيلا المجهضة وتم إضافة 10 ميکرو ليتر من مصل کلٍ من العينات والشواهد وبذلک يکون قد مُدِّد مصل کل من الشواهد والعينات بنسبة 1/20 حيث تم إضافة مصل الشاهد السلبي إلى حفرتين ، وکذلک تم إضافة مصل الشاهد الايجابي  إلى حفرتين  ومصل العينات إلى باقي حفر الطبق. 

وقد تم نقل محلول التمديد 4 (Dilution Buffer 4) إلى الطبق بواسطة ميکروبيبيت يحتوي12  رأس وکذلک يتم نقل مصل الشواهد والعينات إلى الطبق بواسطة ميکروبيب له رأس واحد مع مراعاة الترتيب الرقمي واستبعاد رؤوس الماصات بعد الانتهاء من نقل کل عينة. وتم تجانس محتويات الحفر بالهز اللطيف في الطبق بوضعه على هزازة الکترونية وتم تغطية الطبق برقاقة من الألمنيوم ومن ثم حُضن لمدة ساعة (± 5 دقائق) في درجة حرارة 37°C (± 3°C). وبعد انتهاء مدة التحضين تم إجراء عملية الغسيل بإفراغ کافة محتويات حفر طبق الإليزا جيداً بقلبه ومن ثم أُجري التنشيف بقلب الطبق على ورق نشاف نظيف وجاف عدة مرات ومن ثم تم ملء الحفر في الطبق بمحلول الغسيل الذي تم تمديده مسبقاً بنسبة  1/20 في الماء المقطر وتم إفراغ محتوياته ثانية وتکرر عملية الغسيل ثلاثة مرات لإزالة جميع الارتباطات غير النوعية بين الأضداد والمستضد. بعد الانتهاء من عملية الغسيل وتفريغ محتويات طبق الاليز تم إضافة 100 ميکروليتر لکل حفرة من المقترن الممدد بنسبة 1/100 من محلول التمديد1 (Dilution Buffer 1) بواسطة ماصات 8-12 رأس واستبعاد رؤوس الماصات و تم تغطية الطبق برقاقة من الألمنيوم وحُضن لمدة 30 دقيقة (± 3 دقائق) في درجة حرارة 37°C (± 5°C).

بعد انتهاء مدة التحضين تم إجراء عملية الغسيل مرة ثانية وتکرر عملية الغسيل ثلاثة مرات. وبعد الانتهاء من عملية الغسيل تم إضافة الکاشف اللوني حيث يوزع 100 ميکروليتر من Revelation Solution N°2"" الجاهز للاستخدام (لا يحتاج إلى تمديد) إلى کل حفرة من حفر طبق الإليزا ، وتم استبعاد رؤوس الماصات وتغطية الطبق برقاقة من الألمنيوم ويحضن الطبق بدرجة حرارة 21°C+ (±5°C) لمدة عشرون دقيقة بعيداً عن الضوء. وبعد الانتهاء من مدة التحضين تم إضافة100  ميکروليتر من محلول إيقاف التفاعل Stop Solutionإلى کل حفرة ومن ثم تم هز الطبق بلطف حتى يتجانس محلول التلوين ومُسح أسفل الطبق بحذر. ومن ثم تمت عملية  قراءة نتيجة الاختبار على الطبق باستخدام جهاز قارئ الإليزا (EL X  800) على طول موجة450nm  حيث تظهر قيم معدل الامتصاص الضوئي (O.D الکثافة الضوئية optical densities) لکل حفرة من حفر طبق الاليزا ELISA وتحسب الکثافة الضوئية O.D لکل مصل بطرح قيمة O.D المحصول عليها من الحفر المغطاة بمستضد الکلاميديافيلا من قيمة O.D المحصول عليها من الحفر غير المغطاة بمستضد الکلاميديافيلا. تعتبر النتائج موثوقة إذا کانت قيمة معدل الشاهد الإيجابي غير المصحح أقل ما يمکن 0,350. والنسبة بين معدل القيمة المصححة للکثافة الضوئية OD للشاهد الإيجابي على طول موجة 450 nm والقيمة المصححة للکثافة الضوئية OD للشاهد السلبيّ على طول موجة 450 nm هي اکبر أو تعادل .3.5

تُحسب النسبة المئوية للمعدَّل الإيجابي لکل عيّنة مُختبرة sample to positive   S/P% من أجل تفسير نتائج العينات التي تم اختبارها وفق المعادلة التالية:

S/P%= (corrected OD450 of the sample/mean corrected OD450 of the positive control)x100

فإذا کانت قيمة S/P% تساوي أو أقل من50   %تعد الحيوانات سلبية للکلاميديافيلا المجهضة وإذا کانت قيمة S/P%بين (50 و 60) % تکون الحيوانات مشتبهة أما إذا کانت قيمة  S/P%تساوي أو اکبر من 60% وأقل من 100% تعد الحيوانات إيجابية للکلاميديافيلا المجهضة بشکل واضح أما إذا کانت اکبر من 100 % فإنها تعد إيجابية.

Results

النتائــج

تم دراسة 24 قطيع أغنام في المنطقة الشمالية في سورية في محافظتان هما محافظة حلب ومحافظة الرقة. عدد الأغنام في هذه القطعان هو 1794 وعدد الأغنام الحوامل هو 1501 رأس غنم. تم جمع عينات الدم من الأغنام المجهضة في هذه القطعان وعدده 418 عينة. وتبين بأن معدل الإجهاض هو 27.85% (418/1501) کما هو موضح في الجدول رقم (1)

الجدول رقم 1: معدل الإجهاض عند الأغنام الحوامل في المنطقة الشمالية من سورية.

کما وجدت الأجسام المضادة للکلاميديافيلا المجهضة في 15 قطيع من أصل 24 قطيع تم دراستها أي نسبة 62.5 % من القطعان کان فيها حالات إيجابية. وتراوحت نسب انتشار الحالات الايجابية في قطعان الدراسة بين (4 % - 25 %).

سجلت أن الدراسة 8.61 % (36/418) من أغنام الدراسة کانت إيجابية  للأجسام المضادة النوعية للکلاميديافيلا المجهضة والانتشار المصلي للکلاميديافيلا المجهضة في قطعان الدراسة تراوح بين (4 % - 25 %) حيث کان الانتشار المصلي في محافظة حلب 7,98 % (29/363 ) وفي محافظة الرقة 12,72% (7/55).

وأثبتت الدراسة الحالية أن  2.63 % (11/418) من الأغنام التي تم اختبارها کانت مشتبهة بالإصابة بالکلاميديافيلا المجهضة ، والجدول رقم (2) يوضح التوزيع التکراري النسبي للأغنام الإيجابية والمشتبهة والسلبية مصلياً في مناطق الدراسة خلال الفترة من تشرين الثاني لعام 2009 وحتى شهر نيسان لعام 2010.

الجدول رقم 2: التوزيع التکراري النسبي للأغنام الإيجابية والمشتبهة والسلبية مصلياً في مناطق الدراسة خلال الفترة من تشرين الثاني لعام 2009 وحتى شهر نيسان لعام 2010.

وقد تبين من مقارنة  نتائج الاختبار المصلي مع أعمار أغنام الدراسة  أن 12 حالة من الحالات الإيجابية مصلياً  seropositive کانت بعمر 3 سنوات (26.67%) و10 حالة کانت بعمر سنتين 22.22)  %) و5 حالات بعمر 4 سنوات ) 11.11 % ) و5 حالات بعمر5  سنوات (11.11 %) و3 حالات بعمر 6 سنوات (6.67 %) وحالة واحدة بعمر سنة (2,22 %)، والجدول رقم (3) يبين مقارنة الحالات الايجابية مع العمر الإنتاجي لأغنام الدراسة.

الجدول رقم 3: مقارنة الحالات الايجابية مع العمر الإنتاجي لأغنام الدراسة في المنطقة الشمالية من سورية.

وباستخدام اختبار بيرسون مربع کايPearsons chi squar  لمقارنة نسب الانتشار المصلي حسب العمر وجد أن هناک فروقات معنوية واضحة بين نسب الانتشار في الأعمار التي تقل عن سنتين والأعمار المتقدمة / تزيد عن سنتين / P= 0.0000)) کما وجد أن أکثر الأعمار إصابة بالمرض بعمر سنتين وثلاثة سنوات مقارنة مع الأعمار الإنتاجية في الموسم الرابع والخامس والسادس الإنتاجي و بفروقات معنوية واضحة (P=0.0000).

التحليل الإحصائي: Statistical Analysis Methods

استخدام اختبار بيرسون مربع کاي Pearsons chi squar لمقارنة نسب الانتشار المصلي الايجابية مع الأعمار الإنتاجية لأغنام الدراسة لتحديد الأعمار الإنتاجية الأکثر قابلية للإصابة لمرض إجهاض الأغنام المستوطن.

Discussion and Conclusion

المناقشة والاستنتاجات

تعد أمراض الإجهاض هي من الأمراض المستوطنة في الجمهورية العربية السورية وقد أصبح الإجهاض من الأعراض المألوفة لدى المربين نتيجة تکرار الإصابات سنوياً في الأغنام الحوامل. وتعد الکلاميديافيلا المجهضة أحد أهم المسببات المرضية التي تسبب الإجهاض عند الأغنام(OIE, 2000 ; Da Silva et al., 2006).

عدد الأغنام الحوامل في قطعان الدراسة هو 1501 رأس غنم ، تم جمع عينات الدم من الأغنام المجهضة في هذه القطعان وعدده 418 عينة. وتبين بأن معدل الإجهاض هو 27.85% (418/1501) کما هو موضح في الجدول رقم (Aikten, 1993). والأجسام المضادة للکلاميديافيلا المجهضة وُجدتْ في 15 قطيع من أصل 24 قطيع تم دراستها أي نسبة 62.5 % من قطعان الدراسة کان فيها حالات إيجابية. في هذه الدراسة 8.61 % (36 / 418) من الأغنام کانت إيجابية  للأجسام المضادة النوعية للکلاميديافيلا المجهضة والانتشار المصلي للکلاميديافيلا المجهضة في قطعان الدراسة تراوح بين (4%-25%) حيث کان الانتشار المصلي في محافظة حلب 7,98 % (29/363) وفي محافظة الرقة 12,72% (7/55). وبينت الدراسة أن 2.63% (11/ 418) من الأغنام التي تم اختبارها کانت مشتبهة بالإصابة بالکلاميديافيلا المجهضة ، والجدول رقم (2) يوضح التوزيع التکراري النسبي للأغنام الإيجابية والمشتبهة والسلبية مصلياً في مناطق الدراسة خلال الفترة من تشرين الثاني لعام 2009 وحتى شهر نيسان لعام 2010.

أثبتت الدراسة بأنه لم تکن هناک فروقات معنوية بين الانتشار المصلي للکلاميديا فيلا المجهضة في قطعان الدراسة في محافظة حلب ومحافظة الرقة (P=1.0000).

وسجلت الدراسة أن أعلى انتشار مصلي ايجابي في الأعمار الإنتاجية المتراوحة بين سنتين وثلاثة سنوات مقارنة مع الأعمار الإنتاجية الأخرى وهذا يثبت أن الأغنام اليافعة أکثر قابلية للإصابة مقارنة مع الأغنام الفتية والمعمرة. باستخدام اختبار بيرسون مربع کايPearsons  chi squar  لمقارنة نسب الانتشار المصلي حسب العمر وجد ان هناک فروقات معنوية واضحة بين نسب الانتشار في الاعمار التي تقل عن سنتين والاعمار المتقدمة / تزيد عن سنتين / P= 0.0000)) کما وجد ان اکثر الاعمار اصابة بالمرض بعمر سنتين وثلاثة سنوات مقارنة مع الأعمار الإنتاجية في الموسم الرابع والخامس والسادس الإنتاجي وبفروقات معنوية واضحة (P=0.0000). ويمکن أن يعزى الانتشار المصلي لهذا المرض نتيجة طرح الحيوانات المصابة لإعداد کبيرة من العامل المسبب وقت حدوث الإجهاض أو الولادة وبشکل خاص مع المشيمة والاطلاقات المهبلية وإمکانية طرحه مع الحليب والبراز والإفرازات الأنفية والعينية من الإناث المجهضة وأيضـا إمکانيـة انتقالـه عن الطريـق التناسلي مؤدياً إلى موت الأجنة أو العقـم (Nietfeld, 2001 ; Masala et al., 2005 ; Da Silva et al., 2006) فالحيوانات القابلة للإصابة يمکن أن تصاب عن طريق تناول أو استنشاق المادة المصابة بالکلاميديافيلا المجهضة نتيجة تلوث حظائر الولادات بالسوائل الولادية والأغشية الجنينيـة، وفي الحيوانـات غيـر الحوامل يمکن أن يبقى بشکل کامن في النسيج اللمفـاوي حيـث يبقـى حتـى الفتـرة الأخيـرة مـن الحمـل المقبـل         (Entrican et al., 2001 ; Nietfeld, 2001 ; Da Silva et al., 2006) ويمکن أن يستمر طرح العامل المسبب خلال دورات الشبق والولادات اللاحقة ولهذا يستمر تلوث البيئة وانتشار العدوى (Nietfeld, 2001 ; Da Silva et al., 2006).

الانتشار المصلي للحالات الايجابية الذي سجلته هذه الدراسة يتوافق بشکل تقريبي مع ما سجلته دول الجوار حيث ثبت أن الانتشار المصلي لمرض إجهاض الأغنام المستوطن في ترکيا هو13.98% (Gokce et al., 2007). کما أثبتت دراسة أخرى أجريت في إيران بان الانتشار المصلي کان 8.9 % ولا يوجد أي ارتباط بين الأصابة والعمر الانتاجي (Ghorbanpoor et al., 2007). أما في المملکة الأردنية فمن خلال دراسة عن الانتشار المصلي للأجسام المضادة للکلاميديا فيلا المجهضة عند أغنام العواس والماعز البلدي  في الأردن ثبُت بأن 21.8% کانت ايجابية ولم يکن للعمر تأثير معنوي على الإصابة بهذا المرض (P>0.05) (Al-Qudah et al., 2004). توافقت نتائج الدراسة الحالية مع نتائج دراسة أجريت في مصر بواسطة اختبار تثبيت المتممة عام 1993 حيث أثبتت بان الانتشـار المصلـي کـان في 11.68% من أغنـام المـزارع المصريـة (El-Sayed, 1993). توافقت نتائج هذه الدراسة مع ما سجلته دراسة أجريت في الهند من اجل التقصي الحقلي عن المسببات الجرثومية المسببة للإجهـاض بين الأغنام والماعز حيث سجلت معدل انتشار 7.14% (8/112) (Sharma et al., 2008).

ولم تتوافق دراسة أخرى أجريت في فلسطين خلال عام 1999-2000  بينت بان الکلاميدييا الببغائية مسؤولة عن 60% من الاجهاضات (Barhoom, 2007). وکذلک لم تتوافق مع دراسة أجريت في تونس لعزل وتصنيف العترات المحلية للکلاميديا فيلا المجهضة في تونس تبين بان 58% من المسحات المهبلية کانت ايجابية بواسطة اختبار الاليزا و18% کانت ايجابية على الخلايا المزرعية (Rekiki et al., 2002). دراسة أخرى أجريت في البرازيل لتحديد الانتشار المصلي للکلاميديا فيلا المجهضة في البرازيل حيث سجلت معدل انتشار 21.5 % (Junior1 et al., 2010). وکذلک مع دراسة أجريت في لتوانيا من اجل الانتشار المصلي وطرق تشخيص إجهاض الأغنام المستوطن حيث أن 26.9 % من الأغنام المختبرة کانت ايجابية وأغلبية الأغنام الايجابية 86.4% کانت بعمر24-18  شهر (Bagdonas et al., 2007). أما بالمقارنة مع نتائج دراسـة أجريت في جزيـرة سردينيـا في ايطاليا فقد کانت نتائج الدراسة اقل مما سجلتـه نتائـج الدراسـة الحاليـة حيث سجلت الدراسة معدل انتشار 4.8% (Masala et al., 2005). وکانت نتائج الدراسة الحالية متوافقة مع دراسة أجريت في سلوفاکيا من اجل المسح المصلي للکلاميديا الببغائية في جمهورية سلوفاکيا خلال السنوات من عام 2000-1996 تبين من خلالها بان الانتشار المصلي في عام 1996 هو% 6.37  وفي عام 1997 هو 9.25 % وفي عام 1998 هو 9.57 % وفي عام 1999 هو % 7.91 وفي عام 2000 هو  10.99% (Travnieek et al., 2001). تشير النتائج بأن عدوى الکلاميديافيلا المجهضة منتشرةً في قطعان الأغنام في المنطقة الشمالية في سورية. وبناًء على ذلک يجب القيام بدراسات أشمل لتحديد معدلات الإصابة في القطر بالکامل، وعزل العامل المسبب، وتأکيد دوره في الاضطرابات التناسلية عند الأغنام بالإضافة إلى ذلک يجب اتخاذ کافة الإجراءات الوقائية، وتعزيز البرامج الصحية في المناطق التي شملتها الدراسة من أجل الحد من انتشار المرض وخفض معدلات الخمج لضمان بقاء القطعان خالية من العدوى، ولخفض تلوث البيئة بهذه المسببات وخطر انتقالها المحتمل إلى الإنسان.

References

المـراجــع

Aikten, I.D. (1993): Ovine clamydial abortion. In: Woldehiwet, Z.; Ristic, M. (Eds.), Rickettsial and Chlamydial. Diseases of Domestic Animals. Pergamon Press: Oxford, p. 349-360.

Aikten, I.D. (2007): Clamydial abortion. In: Aikten, I.D. Diseases of Sheep. Blackell Science: Oxford, p. 247-290.

Al-Qudah, K.M.; Sharif, L.A.; Raouf, R.Y.; Hailat, N.Q. and Al-Domy, F.M. (2004): Seroprevalence of antibodies to Chlamydophila abortus shown in Awassi sheep and local goats in Jordan. Vet. Med. – Czech, 12: 460-466.

Appleyard, W.T.; Aitken, I.D. and Anderson, I.E. (1985): Attempted veneral transmission of Chlamydia psittaci in sheep. Vet. Rec. 116: 535-538.

Bagdonas, J.; Šalomskas, A.; Petkevičius, S.; Augustinavičius, Ž.; Gerulis, G. and Mockeliūnas, R. (2007): The Prevalence and diagnostic  methods of ewes enzootic abortion in Lituania. Vetrinarijair Zootechnik. T. 37 (59).

Barhoom, S. (2007): Enzootic abortion of ewes (ovine chlamydiosis): diagnosis and control. The Islamic University J., 15( 2): 15-19.

Borel, N.; Doherr, M.G.; Vretou, E.; Psarrou, E.; Thoma, R. and Pospischil, A. (2004): Seroprevalences for ovine enzootic abortion  in Switzerland. Prev. Vet. Med. 2004, 65: 205-216.

CFSPH "The Center for Food Security and Public Health. Zoonotic Clamydiae from Mammals" (2009): Available at: http://www.cfsph.iastate.edu. Accessed: 01 february 2008.

Da Silva, F.G.; De Freitas, J.C. and Muller, E.E. (2006): Chlamydophila abortus in production animals. Cienc Rural, 36: 342-348.

El-Sayed, A.S.A. (1993): Studies on chlamydiosis in farm animals. Ph. Thesis (Infectious diseases). Fac. Vet. Med., Cairo Univ., Egypt

Entrican, G.; Buxton, D. and Longbottom, D. (2001): Chlamydial infection in sheep: immune control versus fetal pathology. J. Roy. Soc. Med. 94: 273-277.

Entrican, G. (2002): Immune regulation during pregnancy and host-pathogen interactions in infectious abortion. J. Comp. Pathol., 126: 79–94.

Everett, K.D.E.; Bush, R.M. and Andersen, A.A. (1999): Emended description of the order Chlamydiales, proposal of  Parachlamydiaceae fam. nov. and Simkaniaceae fam. nov., each containing one monotypic genus of the family Chlamydiaceae, including a new genus and five new species, and standards for the identification of organisms. Int. J. System. Bact., 49:       415–440.

Galiero, G. (2007): Causes of infectious abortion in the Mediterranean buffalo. Ital. J. Anim. Sci. 6: 194-199.

Ghorbanpoor, M.; Goraninejad, S. and Heydari, R. (2007): Serology study on enzootic abortion of ewes in Ahvaz, Iran. Journal of Animal and Veterinary Advances 6(10): 1194-1196.

Gokce, I.H.; Kacar, C.; Genc, O. and Sozmen, M. (2007): Seropevalance of chlamydophila abortus in aborting ewes and dairy cattle in the north-east part of  turkey, Bull Vet Inst Pulawy, 51: 9-13.

Jones, G.E. and Anderson, I.E. (1988): Chlamydia psittaci: Is tonsilar tissue the portal of entry in ovine enzootic abortion. Res. Vet. Sci., 44: 260–261.

Jorgensen, D.M. (1997): Gestational psittacosis in a Montana sheep rancher. Emerg. Infect. Dis., 3: 191–194.

Junior1, J.; Mota, A.; Piatti, M.; Oliveira, F.; Silva, A.; Abreu, S.; Anderlini, G.; and Valença, R. (2010): Seroprevalence of  antibodies to chlamydophila abortus in ovine in the state of  ALAgoas, Brazil. Brazilian Journal of Microbiology, 41:       358-364.

Longbottom, D.; Fairley, S.; Chapman, S.; Psarrou, E.; Vretou, E. and Livingtsone (2002): Serological diagnosis of ovine enzootic   abortion by enzyme-linked immunosorbent assay with a recombinant protein fragment of the polymorphic outer membrane protein POMP90 of Chlamydophila abortus. Journal of Clinical Microbiology, 40: 4235-4243.

Masala, G.; Porcu, R.; Sana, G.; Tanda, A. and Tola, S. (2005): Role of Chlamydophila abortus in ovine and caprine abortion in Sardinia, Italy. Vet. Res. Commun. 29: 117-123.

Morgan, K.L.; Wills, J.M. and Howard, P. (1988): Isolation of Chlamydia psittaci from the genital tract of lambs: A possible links with enzootic abortion in ewes. Vet. Rec.123: 399-400

Mousa, H.A.A.; Mahmoud, H.A. and Ibrhim, M.A. (2010): Detetion of Chlamydia in rabbit using traditional methods and electron microscope. Global Veterinaria 4(1): 74-77.

Niemczuk, K. (2005): Prevalence of antibodies against Chlamydia psittaci and Chlamydophila abortus in cattle in Poland. A preliminary report. Bull Vet Inst Pulawy, 49: 293-297.

Nietfeld, J.C. (2001): Chlamydial infections in small ruminants. Vet. Clin North Am Food Anim Pract, 17: 301-314.

OIE "Office International De Epizooties" (2000): Manual of Standard Diagnostic Tests and Vaccines

OIE "Terrestrial Manual" (2008): Office International des Epizooties. Chapter 2.7.7. -Enzootic abortion of ewes (ovine chlamydiosis). In: Manual of diagnostic testes and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and bees) 4th edn. World organisation for animal health, pp. 1013-1020.

Papp, J.R.; Shewen, P.E. and Gartly, C.J. (1994): Abortion and subsequent excretion of chlamydiae from the reproductive tract of sheep during oestrus. Infect. Immun., 62: 3786–3792.

Rekiki, A.; Sidi-Boumedine, K.; Souriau, A.; Jemli, J.; Hammami, S. and Rodolakis, A. (2002) Isolation and characterization  of  local strains of Chlamydophila abortus (Chlamydia psittaci serotype 1) from Tunisia. Vet. Res., 33: 215-222.

Rodolakis, A.; Salinas, J. and Papp, J. (1998): Recent advances on ovine chlamydial abortion. Vet. Res. 29 (3/4): 275-288.

Sharma, M.; Batta, K.M.; Katoch, R.C. and Andersen, A.A. (2008): A field investigation of bacterial etiology of abortions among migratory sheep and goats in North-West hill states of India, Veterinarski Arhiv 78 (1), 65-71.

Shewen, P.E. (1980): Chlamydial infection in animals: a review. Can. Vet. J. 21: 2–11.

Travnicek, M.; Kovacova, D.; Bhide, M.R.; Zubricky, P. and Cislakova, L. (2002): Field evaluation of an iELISA and CF test for detection of IgG antibodies against Chlamydophila abortus in goats, sheep, and rams. Vet. Med. Czech, 47: 195-198.

Travnieek, M.; Kovaeova, D.; Zubricky, P. and Èislakova, L. (2001): Serosurvey of sheep and goats to Chlamydia psittaci in Slovakia  during  the  years (1996–2000). Vet. Med. - Czech, 46: 281-285.

Vlahović, K.; Dovč, A. and Lasta, P. (2006): Zoonotic aspects of animal chlamydioses-a review. Veterinarski Arhiv 76 (Suppl.),        S259-S274.

Vretou,  E.; Radouani, F.; Psarrou, E.; Kritikos, I.; Xylouri, E. and  Mangana, O. (2007): Evaluation of two commercial assays for   the detection of Chlamydophila abortus antibodies. Veterinary Microbiology, 123: 153-161.

Williams, E.J. and Donovan, J.O. (2009): Ovine abortion: an overview, Irish Veterinary Journal 62, 5: 342-346.

Wilsmore, A.J.; Dawson, M.; Trower, C.J.; Venables, C. and Arthur, M.J. (1986): Ovine enzootic abortion: field observations on naturally acquired and vaccine-elicited delayed type hypersensitivity to Chlamydia psittaci. Vet. Rec., 118: 331–332.

Wilsmore, A.J. and Dawson, M. (1990): Chlamidial diseases of ruminant in Britain. In: Aitken, D. Agriculture Chlamydial diseases of ruminants. Commission of the European Communities Seminar, p.13-16