THE RESULTS OF THE EFFECT OF ANTIBIOTICS ON CAMPYLOBACTER FETUS IN NORTH AREA OF SYRIA

THE RESULTS OF THE EFFECT OF ANTIBIOTICS ON CAMPYLOBACTER FETUS IN NORTH AREA OF SYRIA

M. ELEWE^* and Y. AL-YASENO^**

^*Dept. of Infectious Diseases, Fac.Vet. Med.AL-BaathUniversity.

^**Dept. of Infectious Diseases, Fac.Vet. Med.AL-BaathUniversity.

Email: mhmadelewe@hotmail.com

نتائج تأثير الصادات الحيوية على المقوسة الجنينية في المنطقة الشمالية من سورية

محمد العليوي ، ياسين الياسينو

Email: mhmadelewe@hotmail.com

أجريت هذه الدراسة على 15 قطيع في أربع محافظات سورية هي (حلب – الرقة - الحسکة - دير الزور). حيث تم إجراء اختبارات الحساسية على العزولات الايجابية للمقوسة الجنينية ، وقد أخذت العزولات من الأغنام المجهضة و أجنتها . تم أخذ عزولات الأغنام المجهضة من (السوائل المهبلية والمشيمة) وعزولات الأجنة المجهضة من ( الکبد ، الطحال ، الکلية محتويات معدة الجنين). وقد تبين أن أفضل الصادات الحيوية التي أثرت على جراثيم المقوسة الجنينية هو السيبروفلوکساسين.

INTRODUCTION

المقدمـة

تعتبر الأغنام من الحيوانات موسمية التناسل و بما أن لديها  دورات شبق متعددة فقد سميت ( الحيوانات متعددة الشبق الفصلية )  (Seasonal poly estrus)  (Noakes, 1996). معدل طول دورة الشبق في النعاج هو 17 يوم (Jainudeen et al., 2000). أما عدد دورات الشبق في الموسم التناسلي الواحد فهي بين (3-2) دورات شبق (Mittal and Ghosh, 1980). ويبلغ متوسط عدد المواليد 4-1 حملان أما طول موسم الحليب فهو 140-100يوم (Bird et al., 1984) .ويسبب الإجهاض خسائر اقتصادية فادحة من حيث خسارة المواليد والحليب ، بالإضافة إلى الأضرار الصحية التي تتعرض لها الإناث المجهضة. وبالتالي يعتبر الإجهاض مصدر قلق لمربي الأغنام. لذلک يجب التحري عن مسببات الإجهاض إذا تعدى معدل الإجهاض أکثر من 2% (Vidic et al ., 2007). يعرّف الإجهاض في النعاج على أنه طرح جنين أو أثنين أو أکثر ، ويکون الجنين ميتاً أو يبقى حياً لمدة لا تزيد عن 24 ساعة (Miller et al., 1980) .وهناک مسببات عدة للإجهاض حيث يوجد مسببات ذات طبيعة غير معدية وأخرى ذات طبيعة معدية (Mc Donald , 1967) . ففي مسببات الإجهاض غير المعدية  يحدث الإجهاض بشکل فردي ويحدث في أي مرحلة من مراحل الحمل. ومن المسببات غير المعدية نذکر المسببات الغذائية والمواد السمية والمواد الکيميائية والمسببات الهرمونية والعوامل الوراثية (Norton and Campell , 1990). وتعتبر المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية C.f.ssp.f  المسبب الرئيسي للإجهاض في نيوزيلندا وفي السنوات الأخيرة اعتبرت  المسبب الثالث للإجهاض في بريطانياMearns, 2007)  ). وقد وجد في الدانمارک أن60%  من خسائر أجنة الأغنام مرتبط بالمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية (Agerholm et al., 2006). ويتراوح معدل الإجهاض الناشئ عن المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية بين 20-15% ويمکن أن يصل في بعض الأحيان إلى 70% (Vandamme, 2000). وتحصل العدوى بهذه الجراثيم عن طريق تناول الأغنام للعلف والماء الملوثين بالعامل المسبب (Dyre, 2008). أما العرض الرئيسي عند خمج الأغنام بهذه الجراثيم هو الإجهاض في الأسابيع الست الأخيرة من الحمل أو ولادة حملان ضعيفة (Mearns, 2007). يمکن أن تشخص المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية عند الأغنام بعزل الجراثيم واثبات وجودها على شکل مقوس أو شکل حرف S أو بشکل عصي حلزونية وملاحظة الحرکة السهمية المميزة باستخدام المجهر المتباين الطور Hum et al., 2009)). تسبب المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية الإجهاض في الأغنام والإجهاض المتقطع في الأبقار وتسبب عدوى متقطعة في الإنسان (Vandamme, 2000) .وتسبب المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينيةC.f.ssp.f  الإنتان الدموي عند الإنسان و17-43% من المرضى الذين حدث عندهم الإنتان الدموي ماتوا نتيجة لذلک (Morrison et al.,1990). الأغنام التي تجهض بسبب المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية تبقى مخصبة (Marsh et al.,1954). يجب عزل الأغنام المجهضة في أماکن خاصة والتخلص من مخلفات الإجهاض والفرشة الملوثة للحد من انتشار المرض , ويجب إبعاد الأغنام السليمة عن المناطق التي يشتبه وجود المرض فيها وتخفيف کثافة التربية وإعطاء الغذاء والماء النظيفين (Mearns, 2007). تکتسب الأغنام المجهضة  مناعة طويلة الأمد تقدر بحوالي ثلاث سنوات ، وهذا يستخدم کطريقة لقاح طبيعية عن طريق خلط الأغنام المجهضة مع الأغنام الغير حوامل ولکن يجب الانتباه من أنه ليس هناک مسببات مرضية أخرى مثل الکلاميديا المجهضة لان خلط الأغنام الغير حامل بالأغنام المجهضة ربما يؤدي إلى الإصابة بالکلاميديا المجهضة في العام القادم. (Mearns, 2007). وتستخـدم اللقاحـات المتعـددة التي تحـوي على الأنماط المصليـة التي تشتـرک  فـي إجهـاض الأغنـام Timoney et al.,1988)). استجابـة الأضداد جيدة لهذه الأنماط المصلية المتعددة في لقاح واحد ، حيـث أن اللقاح يمکن أن يکون فعالاً في منـع الإجهاض في أفراد القطيع الأخـرى عنـد حدوث الجائحـة ( Gilmour et al., 1975). يعطـى لقـاح المقوسات الجنينية تحت نوع الجنينية قبل الــولادة ب  30يــوم ويعاد بعد 60- 90يـوم (Justin and Luther, 2006). اللقاح الذي يحتوي على المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية لا يحمي ضد الإجهاض الذي تسببه المقوسة الصائمية Hum et al., 2009)). يمکن إعطاء التتراسکلين کإجراء وقائي أثناء الحمل کما يعطى في حال الإصابة بالمرض إما حقناً أو مع العلف Hum et al., 2009)). وجد أن الارثرومايسين والسيبروفلوکساسين من أفضل الصادات الحيوية  لمعالجة المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية Collee et al., 1996) ) وتتطلب مقاومة المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية المتزايدة للصادات الحيوية إجراءات حذرة في استعمال الصادات الحيوية Saenz et al., 2000)).

يهدف البحث إلى إيجاد أفضل الصادات الحيوية التي تؤثر على المقوسة الجنينية.

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق البحث

جمع العينات: تم جمع / 202 /عينة من أربع محافظات في سورية وهي :/ حلب , الرقة , دير الزور، الحسکة /، حيث جمعت العينات من الأغنام المجهضة من (المرارة , المشيمة  ، الإفرازات المهبلية). وأيضاً أخذت عينات من الأجنة المجهضة (الکبد , الطحال , الرئة ، الکلية , محتويات معدة الجنين). ثم نقلت العينات بشروط صحية عقيمة  في حافظات تحوي على الجليد, ثم تم حفظها في درجة حرارة -20م Hum et al., 2009))  ، حتى إجراء الاختبارات اللازمة عليها. وقد تم إجراء البحث في مخابر کلية الطب البيطري ومخابر دائرة الصحة الحيوانية في محافظة حلب.

الأجهزة المستخدمة: 

• ·   الصاد الموصد  autoclave
• ·   الحاضنة   incubator
• ·   ثلاجة  refrigerator
• مجهر microscope

الأدوات المستخدمة:

• جرة لاهوائيات jar  anaerobic
• ورق ترشيح filter paper
• ميزان دقيق scale
• سلک زرع wire

البيئات الزرعية الجرثومية :

1-  وسط سکيرو أغار الخاص بالکامبيلوباکتر: Skirrow's Campylobacter selective medium

2-  مرق الثيوغلکولات:  Thioglycollate broth

3-  أغار الحديد والسکر الثلاثيT.S.I  (Triple Sugar Iron)

المحاليل المستخدمة لإجراء الاختبارات الکيمياحيوية :  

1-  کاشف حلمهة الهيبورات: Hippurate hydrolysis testing reagent

2-  کاشف الاوکسيداز: Oxidase Discs

3-  محلول بيروکسيد الهيدروجين 3% : 3%  Hydrogen peroxide solution(H2O2)

4-  صبغة غرام    Gram stain

طريقة العمل:

تحضير وزرع العينات: تم زرع العينات بعد أخذها بشکل عقيم على الأوساط الانتقائية وحضنت تحت ظروف دقية الهواء (5% أوکسجين -10% غاز الکربون -85% نتروجين) في جرة الزرع اللاهوائي باستخدام عبوات الزرع اللاهوائي أو باستخدام بالشمعة وحضنت على الدرجة 37م لمدة 5 أيام .

 التعرف على المقوسة الجنينية:

الصفات المزرعية: تم فحص جميع المستعمرات النامية على المنبت الانتقائي حيث ظهرت المقوسات الجنينية  تحت نوع الجنينية C.f.ssp.f في العزل الأولي على شکل مستعمرات  : صغيرة ،نصف شفافة , مدورة , ناعمة ، وتنتشر على طول اتجاه التخطيط .وقد زرعت المستعمرات المشکوک بها مرة أخرى على نفس المنبت بغرض التنقية (Bryner et al., 1964).

4  -2-2 صبغة غرام Gram stain: تمت  الصباغة بصبغة غرام و لم تتقبل هذه الجراثيم الصبغة ,حيث ظهرت بلون وردي وهو لون الصبغة البديلة مما يدل على أنها جراثيم سلبية الغرام  وعند فحصها بالمجهر ظهرت على شکل الضمة أو شکل حرف S أو الشکل اللولبي  (Smibert,1974).

4-2-3  اختبار الحرکة  :Motility of bacteriaأجري هذا الاختبار على المستعمرات النامية على المنابت الحديثة  حيث نقلت نقطة صغيرة من المستعمرة الجرثومية حديثة النمو إلى وسط شريحة وعلقت بنقطتين من المحلول الفيزيولوجي ثم وضع عليها ساترة زجاجية وفحصت بالتکبير المتوسط مع تقليل الإضاءة وحيث لوحظ أن هذه الجراثيم تتحرک بحرکة سهمية سريعة اندفاعية (Crock screw) تميز هذه الجراثيم (Kudirkiene et al., 2008).

الاختبارات الکيمياحيوية: Biochemical Tests

تهدف الاختبارات الکيمياحيوية للتمييز بين المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية والمقوسة الصائمية لأنهما أهم  المقوسات المسببة للإجهاض  عند الأغنام.

• اختبار الکاتلازCatalase activity Test : تم أجراء هذا الاختبار على المستعمرات الحديثة , حيث وضعت مستعمرة جرثومية على شريحة زجاجيــة وأضيــف إليها المــاء الاوکسجيني 3% وقد لــوحظ وجــود الفقاعــات الغازية مباشرة وهذا دليل على ايجابية الاختبار (Kudirkiene et al., 2008).

• اختبار الاوکسيدازOxidase Test  : أخذنا قرص من أقراص الکاشف الجاهزة فرشنا المستعمرة الجرثومية بواسطة سلک الزرع على القرص فلاحظنا تغير اللون إلى بنفسجي خلال 10 دقائق (Kudirkiene et al., 2008).

• اختبار إنتاج کبريت الهيدروجين  Hydrogen sulphide production H2S:زرعت  المستعمرات في وسط أغار الحديد والسکر الثلاثي T.S.I  ثم حضنت بدرجة حرارة  37 م◦ لمدة48   ساعة ضمن شروط  دقية الهواء ،ولم نلاحظ ظهور اللون الأسود وهذا دليل على سلبية الاختبار (Park et al.,1984).

• حلمهة الهيبورات  Hippurate Hydrolysis Test :أخذنا أنبوب يحتوي على 0.4 مل من کاشف هيبورات الصوديوم (1%) وزرعنا المستعمرة الجرثومية وحضنت لمدة ساعتين في حمام مائي ثم أضفنا کاشف الننهدرين 0.2 مل وحضنت لمدة 15 دقيقة , ولم نلاحظ ظهور اللون البنفسجي دليل على سلبية الاختبار (Baron et al.,1994).

•  النمو على وسط الغليسينGlycin tolarence Test : تم تحضير وسط الثيوغليکولات غليسين حيث أخذ 1غ غليسين و100 مل مرق ثيوغليکولات وتم تحضين المستعمرة الجرثومية بدرجة حرارة  37لمدة 5 أيام تحت شروط لاهوائية ، ثم فحصت الحرکة تحت المجهر،  فلوحظ أن هذه الجراثيم تتحرک بحرکتها السهمية المميزة (Park et al., 1984).

• التحسس الجرثوميAntibiotic sensitivity : فرشت قطرة من معلق جرثومي على کامل سطح أطباق الکامبيلوباکتر اجار ووضع على سطح کل طبق أقراص مشبعة بالصادات الحيوية التالية:
• البنسللين           Penicillin              10 IU))
• الجنتامايسين      Gentamycin          (10 mcg)
• النيومايسين       Neomycin              (30 mcg)
• ارثرومايسين      Erythromycin      (15 mcg)
• تتراسکلين Tetracycline                 (30 mcg )
• ستربتومايسين      Streptomycin     (10 mcg)
• سيبروفلوکساسين   Ciprofloxacin   (5 mcg)

وبعد التحضين في درجة 37 لمدة 48 ساعة تم قياس قطر منطقة منع النمو حول الأقراص ثم تم مقارنتها مع أقطار منع النمو القياسية العالمية ثم تم تقييم الحساسية والمقاومة لهذه الصادات.

RESULTS

النتائج

کانت نتائج تأثير الصادات الحيوية على جراثيم المقوسة  الجنينية تحت نوع الجنينية  C.f.ssp.fالمعزولة کالتالي: 9% من العزولات کانت حساسة للبنسلين حيث کان عدد العزولات الحساسة للبنسلين عزولتين من أصل 22 عزولة (8 عزولات من محتويات معدة الجنين ، 5عزولات من کبد الجنين ،3 عزولات من طحال الجنين ، عزولة واحدة من کلية الجنين ، 4 عزولات من السوائل المهبلية ، عزولة واحدة من المشيمة) ،36% من العزولات حساسة للجنتامايسين،77% من العزولات حساسة للنيومايسين،82% من العزولات حساسة للارثرومايسين،55% من العزولات حساسة للتتراسکلين،9% من العزولات حساسة للستربتومايسين،91% من العزولات حساسة للسيبروفلوکساسين.

DISCUSSION

المناقشة

 بينت الدراسة أن :9% من العزولات کانت حساسة للبنسلين ، 36% من العزولات حساسة للجنتامايسين ، 77% من العزولات حساسة للنيومايسين ، 82% من العزولات حساسة للارثرومايسين ، 55% من العزولات حساسة للتتراسکلين ، 9% من العزولات حساسة للستربتومايسين ، 91% من العزولات حساسة للسيبروفلوکساسين. ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية تبدي مقاومة لأکثر من صاد حيوي , وکانت أعلى مقاومة للستربتومايسين (Adesiyun et al.,1992). وتوافـقت نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن الارثرومايسين هـو الصاد الحيوي الأفضـل لمعالجـة المقوسـة الجنينيـة تحت نوع الجنينية أمـا الذراري المقاومة لهـا فتعـالـج بالسيبروفلوکساسيـن

 Collee et al., 1996))، ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن 96% من الذراري کانت حساسة للجنتامايسين وان 58.6% من الذراري کانت حساسة للارثرومايسين (Smith et al., 1999). ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن المقوسة  الجنينية تحت نوع الجنينية کانت مقاومة للبنسللين  والارثرومايسين والجنتامايسين والکلورام فينيکول والترمثوبريم والسلفاميتوکزازول بنسبة 90%  , وللستربتومايسين والتتراسکلين والنيومايسين بنسبة70% (Kener and Erganis,1990). ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن  عزولات المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية کانت مقاومة للبنسلين بنسبة 100%, ولها حساسية للستربتومايسين بنسبة 90%, وحساسية للتتراسکليــن بنسبة 80% , وحساسيـــة للنيومايسيـــن والجنتامايسيــــن بنسبـــة 80%, وحساسيـــة للانروفلوکساسيــن بنسبــــة 100% (Yasilmen and Gul, 2007) .

CONCLUSIONS

الاستنتاجات

• وجد أن أفضل الصادات الحيوية التي أثرت على جراثيم المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية C.f.ssp.f  هو السيبروفلوکساسين.
• وجد أن للبنسلين فعالية ضعيفة في تأثيره على جراثيم المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية  C.f.ssp.f.

REFERENCES

المراجــع

Adesiyun, A.A.O.; Webb, M.O. and Paul, C. (1992): Isolation of Campylobacters, Salmonellae and Escherichia coli from brollers in commercial poultry processing plants in Trinidad. (In 3rd word congress food born infections and intoxication-Berlin).16-19 June 1992.Volume I.

Agerholm, J.S.; Aalbaek, B.; Fog-Larsen, A.M.; Boye, M.; Holm, E.; Jensen, T.K.; Lindhardt, T.; Larsen, L.E. and Buxton, D. (2006): Veterinary and medical aspects of abortion in Danish sheep. APMIS. 114,      146–152.

Baron, E.J.; Peterson, L.R. and Finegold, B.M. (1994): Baily and scott's Diagnostic Microbiology.9th Ed. Mosby, St. Louis Baltimore.

Bird, M.M.E.; Stephens, D.J.; Wall, E.P. and De lisle, G.W. (1984): Serologe of Campylobacter fetus strain from 4 out break of Ovine abortion, N.Z. Vet. J, 32: 14-17.

Bryner, J.H.; O'Berry, P.A. and Frank, A.H. (1964): Vibrio infection of the digestive organs of cattle .Am. J.Vet. Res. 25: 1048-1050.

Collee, J.G.; Fraser, A.G.; Marmion, B.P. and Simmons, A. (1996): Mackie and McCartney. Practical medical mrobiology.14th ed. VolI. Longman Singapore Publishers (Pte) Ltd. P: 865.

Dyre, N.W. (2008): Diagnosis of Ovine Abortion – Getting the Most Out of Your Diagnostic Laboratory. Sheep Research Report: 13-14.

Gilmour, N.J.L.; Thompson, D.A. and Fraser, J. (1975): Vaccination against Vibrio (Campylobacter) fetus infection in sheep in late pregnancy. Veterinary Record, 96,129-131.

Hum, S.; Hornitzky, M. and Berg, T. (2009): Ovine Campylobacteriosis. Elizabeth Macarthur Agricultural Institute. Australia:1-8.

Jainudeen, M.R.; Wahid, H. and Hfez, E. (2000): Swheep and goats.7^th edn.Reproduction in farm animals. In.Hafez E.S.E. and B. Hafez (eds). lippincott Williams and wilkins, Philadelphia , USA PP: 172-181.

Justin, S. and Luther, Ph.D. (2006): Abortions in Sheep Causes, Control and Prevention. NDSU Extension Sheep Specialis, AS-1317.

Kenar, B. and Erganis, O. (1990): Isolation and antibiotic susceptibility of Campylobacter spp. in aborted ovine fetuses in the central Black Sea. Veterinarium. 5, 4-11.

Kudirkiene, A.; Malakauskas, A.; Serniene, L. and Malakauskas, M. (2008): Isolation and identifaction of thermophilic Campylobacter ssp. by PCR-RFLP in broiler flocks. Veterinarija IR Zootechnik, A. 42(64): 44-46.

Marsh, H.; Firehammer, B.D. and Scrivner, L.H. (1954): The negative role of the ewe in the transmission of vibriosis in sheep .american journal of veterinary Reaseach. 15(56)352-355.

McDonald, J.W. (1967): An outbreak of abortion due to Listeria monocytogenes in an experimental flock of sheep. Aus. Vet. J. 43: (12) 564-567.

Mearns, R. (2007): Campylobateriosis. pages131-132 In: Diseases of sheep ed, I.D. Aitken. Blackwell publishing, Oxford, U.K.

Miller, J.F.; Williamson, E. and Glue, J. (1980): Fetal loss after implantation: a prospective study. Lancet, i, 554.

Mittal, J.P. and Ghosh, P.K. (1980): A note on annual reproductive rhythm in Marwari sheep of the Rajasthan desert in India. Anim Prod, 30: 153-156.

Morrison, V.A.; Lloyd, B.K. and Chia, J.K. (1990): Cardiovascular and bacteremic manifastations of campylobacter fetus infection: case report and review. Reviews of infection diseases 12(3)387-392.

Noakes, D.E. (1996): Infertility in the ewe and doe, in: Arthur, G.H., Noakes, D.E., Pearson, H., Parkinson, T.J. (Eds.), Veterinary Reproduction and Obstetrics. Saunders, London, pp. 453.

Norton, J.H. and Campbell, R.S.F. (1990): Non-infectious causes of bovine abortion Veterinary Bulletin 60, 1137-1147.

Park, C.E.; Smibert, R.M.; Blaser, M.J.; Vanderzant, C. and Stern, N. (1984): Campylobacter in: "Compendium of methodes for the Microbiological examination of food "2^nd Ed. Speck. M (ed) American public Health Association, Washington, D.C.

Saenz, W.; Zarazaga, M.; Lantero, M.; Gastanares, M.J.; Baquero, F. and Torres, C. (2000): Antibiotic resistance in Campylobacter strains isolated from animals,foods,and human in Spain in 1997-1998.Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 44(2): 267-271.

Smibert, R.M. (1974): Genus II. Campylobacter Sebald and Veron 1963, 907, p. 207-212. In R. E. Buchanan and N. E.Gibbons (ed.), Bergey's manual of determinative bacteriology,8th ed. The Williams and Wilkins Co., Baltimore.        

Smith, S.I.; Sansa, T.I.; Coker, A.O. (1999): Antibiotic susceptility patterns and beta-lactamase production of animal and human isolates of campylobacter in Lagos, Nigeria. Zeitschrift fur Naturforschung. Section C, Biosciences., 54: 583-586.

Timoney, J.F.; Gillespie, J.H.; Scott, F.W. and Barlough, J.E. (1988): The systemic mycoses. In; Hagan and Bruner's Microbiology and Infectious Diseases of Domestic Animals, 8th ed., pp. 153, Comstock Publish ing Associates, Ithaca, NY.

Vandamme, P. (2000): Taxonomy of the family Campylobacteriaceae. In Campylobacter pp.3-26. Edited by Nachamkin, I. and Blaser, M.J. Washington, DC.USA.

VidiĆ, B.; Šeguljev, Z.; Bobos, S. and Jovicin, M. (2007): Q-groznica uovaca. Zbornik kratkih sadržaja VII Savetovanje veterinara Srbije 1/20,(20), Zlatibor 2007.

Yesilmen, S. and Gul, K. (2007): Isolation, identification and antibiotic susceptibility of campylobacter ssp. in aborted sheep fetuses medycyna wet. 63(10).