DETECTION ON CAMPYLOBACTER FETUS IN SHEEPING NORTH AREA OF SYRIA

DETECTION ON CAMPYLOBACTER FETUS IN SHEEPING NORTH AREA OF SYRIA

M.ELEWE^* and Y.AL-YASENO^**

^*Dept. of infectious Diseases, Fac.Vet. Med.AL-BaathUniversity.

^**Dept. of infectious Diseases, Fac.Vet. Med.AL-BaathUniversity.

Email: mhmadelewe@hotmail.com

الکشف عن المقوسة الجنينية في المنطقة الشمالية من سورية

محمد العليوي ، ياسين الياسينو

Email: mhmadelewe@hotmail.com

أجريت الدراسة على 202 نعجة أخّذت من  15 قطيع أغنام من أربع محافظات سورية ( حلب – الرقة – الحسکة – دير الزور) . ثم أجريت الاختبارات الجرثومية والکيمياحيوية على 202 عينة من الأغنام المجهضة وأجنتها وکانت عينات الأغنام المجهضة هي من ( المرارة، المشيمة ، المسحات المهبلية ) وعينات الأجنة المجهضة من (الکبد ، الطحال ، الکلية  محتويات المعدة). وقد تبين أن 15 عزولة أبدت نتائج ايجابية للمقوسة  الجنينية أي بنسبة 7.4 % .حيث سجلت أعلى نسبة للإجهاض بالمقوسة الجنينية في محافظة حلب 10.5% ، بينما بلغت نسبة الإجهاض بالمقوسة الجنينية في محافظة الرقة 6.9% ، أما في محافظة دير الزور فقد کانت النسبة 5.4% ، في حين لم يسجل في محافظة الحسکة أي حالة ايجابية ووجد أن معظم العزولات الايجابية للمقوسة  الجنينية کانت من الأغنام المرباة بطريقة مکثفة.

INTRODUCTION

المقدمة

أول من کتب عن المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية کان العالم Escherich ، حيث کتب مقالة علمية تضمنت وصف لجراثيم لولبية أخذت من الأطفال الذين ماتوا بما يسمى کوليرا الأطفال‘cholera infantum’  ; Dasti,2007) (Friedman et al., 2000. عزلت الجراثيم المعروفة الآن بالمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية بنجاح في بداية هذا القرن في بريطانيا حيث عزل العالمان McFadyean and Stockman هذه الجراثيم من أجنة الأغنام المجهضة ولوحظ أنها تشبه الضمات related vibrio .(McFadyean and Stockman,1913) اکتشف العالم Smith جراثيم لولبية في أجنة الأبقار المجهضة واستنتج أن هذه الجراثيم والجراثيم الشبيهة بالضمات related vibrio تنتمي إلى نفس النوع Smith,1918)). وبسبب شکلها الذي يشبه الضمة أطلق اسم  الضمات الجنينية“Vibrio fetus” على هذه الجراثيم وسمي المرض الذي تسببه هذه الجراثيم الإجهاض الضمي "vibrionic abortion".(Skirrow, 1977; Fox, 1982; Butzler, 1984; Franco, 1988)اسم المقوسات مشتق من الکلمتين اليونانيتين  καμπυλος (kampulos)وتعني المقوسة وβαχτηρς (baktron) وتعني العصا(Sebald and Veron, 1963). تحصل العدوى عن طريق تناول الأغنام للعلف والماء الملوثين بالعامل المسبب (Dyre,2008).تنتقل المقوسة الجنينية  تحت نوع الجنينيةعن طريق تناول الأغنام  الحوامل الأنسجة الجنينية المخموجة  وبعد أن يحدث الإجهاض الأول المقوسة  الجنينية تحت نوع الجنينية  تتعرض أغنام حوامل أخرى لأعداد کبيرة من الجراثيم بسبب تناولها مخلفات الإجهاض وبالتالي ينتج عنها اجهاضات أکثر (Jensen et al., 1961).أماالعرض الأساسي للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينيةهو الإجهاض في الأسابيع الست الأخيرة من الحمل أو ولادة حملان ضعيفة Mearns, 2007)  ). إذا حدثت العدوى أثناء الحمل المبکر  فلن يحدث الإجهاض بسبب امتصاص الجنين ، وإذا حدثت العدوى في منتصف الحمل فسيحدث الإجهاض بعد 10- 20يوم ، وإذا حدثت في آخر الحمل سينتج ولادة حملان ضعيفة أو ميتة (Justin and Luther,2006). ولا يوجد عادة علامات تسبق الإجهاض ، لکن أحياناً يحدث سيلان مهبلي قبل الإجهاض ويحدث احتباس مشيمة عند عدد کبير من الأغنام المجهضة ويترافق هذا الاحتباس بسوء حالة الحيوان العامة نتيجة التهاب الطرق التناسلية بسبب العدوى الثانوية (Hum et al., 2009). کما أن وقت العدوى له أهمية في تحديد نسبة الإجهاض حيث أنه في العدوى التجريبية عند اليوم 105 من الحمل تجهض 100% من الإناث الحوامل ، وإذا حدثت العدوى بعد 3 أسابيع من ذلک تنخفض نسبة الإجهاض إلى 20% وهذا ربما يعکس زيادة المناعة عند الجنين Grogono-Thomas et al., 2000)). يمکن عزل المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينيةمن المشيمة والدم ومحتويات الأمعاء والمرارة والإفرازات المهبلية من الأغنام المخموجة ومن محتويات المعدة والقلب والدم والکبد والرئة من الجنين المجهض.

يهدف البحث إلى الکشف عن المقوسة الجنينية في المنطقة الشمالية من سورية.

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق البحث

جمع العينات: تم جمع / 202 /عينة من أربع محافظات في سورية وهي :/ حلب , الرقة , دير الزور، الحسکة /، حيث جمعت العينات من الأغنام المجهضة وهي (المرارة , المشيمة  ، الإفرازات المهبلية). وأيضاً أخذت عينات من الأجنة المجهضة (الکبد , الطحال , الرئة ، الکلية , محتويات معدة الجنين). ثم نقلت العينات بشروط صحية عقيمة في حافظات تحوي على الجليد , وتم حفظها في درجة حرارة -20مHum et al., 2009)) ، حتى إجراء الاختبارات اللازمة عليها وقد تم إجراء البحث في مخابر کلية الطب البيطري ومخابر دائرة الصحة الحيوانية في محافظة حلب.

الأجهزة المستخدمة : 

• §         الصاد الموصد  Autoclave
• §         الحاضنة   Incubator
• §         ثلاجة  Refrigerator
• مجهر Microscope

الأدوات المستخدمة:

• جرة لاهوائيات Jar  Anaerobic
• ورق ترشيح Filter Paper
• ميزان دقيق Scale
• سلک زرع Wire

البيئات الزرعية الجرثومية:

1-       وسط سکيرو أغار الخاص بالکامبيلوباکتر: Skirrow's Campylobacter selective medium

2-       مرق الثيوغلکولات:   Thioglycollate broth

3-       أغار الحديد والسکر الثلاثيT.S.I  (Triple Sugar Iron)

المحاليل المستخدمة لإجراء الاختبارات الکيمياحيوية :  

1-       کاشف حلمهة الهيبورات :Hippurate hydrolysis testing reagent

2-       کاشف الاوکسيداز: Oxidase Discs

3-       محلول بيروکسيد الهيدروجين 3% : 3%  Hydrogen peroxide solution (H₂O₂)

4-       صبغة غرام      Gram stain

طريقة العمل :

تحضير وزرع العينات: تم زرع العينات بعد أخذها بشکل عقيم على الأوساط الانتقائية وحضنت تحت ظروف دقيه الهواء (5% أوکسجين -10% غاز الکربون -85% نتروجين) في جرة الزرع اللاهوائي باستخدام عبوات الزرع اللاهوائي أو باستخدام بالشمعة وحضنت على الدرجة 37م لمدة 5 أيام.

التعرف على المقوسة الجنينية

1-       الصفات المزرعية: تم فحص جميع المستعمرات النامية على المنبت الانتقائي حيث ظهرت المقوسات الجنينية  تحت نوع الجنينية في العزل الأولي على شکل مستعمرات  : صغيرة ،نصف شفافة , مدورة , ناعمة  وتنتشر على طول اتجاه التخطيط .وقد زرعت المستعمرات المشکوک بها مرة أخرى على نفس المنبت بغرض التنقية (Bryner et al.,1964).

2-       صبغة غرام Gram stain :تمت  الصباغة بصبغة غرام و لم تتقبل هذه الجراثيم الصبغة ,حيث ظهرت بلون وردي وهو لون الصبغة البديلة مما يدل على أنها جراثيم سلبية الغرام  وعند فحصها بالمجهر ظهرت على شکل الضمة أو شکل حرف S أو الشکل اللولبي  (Smibert,1974).

3-       اختبار الحرکة Motility of bacteria :أجري هذا الاختبار على المستعمرات النامية على المنابت الحديثة  حيث نقلت نقطة صغيرة من المستعمرة الجرثومية حديثة النمو إلى وسط شريحة وعلقت بنقطتين من المحلول الفيزيولوجي ثم وضع عليها ساترة زجاجية وفحصت بالتکبير المتوسط مع تقليل الإضاءة وحيث لوحظ أن هذه الجراثيم تتحرک بحرکة سهمية سريعة اندفاعية (Crock screw ) تميز هذه الجراثيم (Kudirkiene et al., 2008).

4-       الاختبارات الکيمياحيوية :Biochemical Tests تهدف الاختبارات الکيمياحيوية للتمييز بين المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية والمقوسة الصائمية لأنهما أهم  المقوسات المسببة للإجهاض عند الأغنام.

• ·  اختبار الکاتلاز:Catalase activity Test  تم أجراء هذا الاختبار على المستعمرات الحديثة , حيث وضعت مستعمرة جرثومية على شريحة زجاجية وأضيف إليها الماء الاوکسجيني 3% وقد لوحظ وجود الفقاعات الغازية مباشرة وهذا دليل على ايجابية الاختبار (Kudirkiene et al., 2008).

• ·  اختبارالاوکسيدازOxidase Test   :أخذنا قرص من أقراص الکاشف الجاهزة فرشنا المستعمرة الجرثومية بواسطة سلک الزرع على القرص فلاحظنا تغير اللون إلى بنفسجي خلال 10 دقائق (Kudirkiene et al., 2008).

• ·  اختبار إنتاج کبريتالهيدروجين  Hydrogen sulphide production H₂S: زرعت  المستعمرات في وسط أغار الحديد والسکر الثلاثي T.S.I    ثم حضنت بدرجة حرارة  37 م◦ لمدة48   ساعة ضمن شروط  دقية الهواء ،ولم نلاحظ ظهور اللون الأسود وهذا دليل على سلبية الاختبار (Park et al.,1984).

• ·  حلمهة الهيبورات  Hippurate Hydrolysis Test: أخذنا أنبوب يحتوي على 0.4 مل من کاشف هيبورات الصوديوم (1%) وزرعنا المستعمرة الجرثومية وحضنت لمدة ساعتين في حمام مائي ثم أضفنا کاشف الننهدرين 0.2 مل وحضنت لمدة 15 دقيقة , ولم نلاحظ ظهور اللون البنفسجي دليل على سلبية الاختبار (Baron et al.,1994).

• ·  النمو على وسط الغليسين Glycin tolarence Test : تم تحضير وسط الثيوغليکولات غليسين حيث أخذ 1غ غليسين و100 مل مرق ثيوغليکولات وتم تحضين المستعمرة الجرثومية بدرجة حرارة  37لمدة 5 أيام تحت شروط لاهوائية ،ثم فحصت الحرکة تحت المجهر، فلوحظ أن هذه الجراثيم تتحرک بحرکتها السهمية المميزة (Park et al.,1984).

RESULTS

النتائج

أظهرت الدراسة وجود 15 عزولة ايجابية (7.4%) للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية من 202عينة تم دراستها. وکانت نسبة العزولات الإيجابية في محافظة حلب 11 عزولة من أصل 105 نعجة مجهضة تم دراستها أي بنسبة 10.5%، کما کانت نسبة العزولات الإيجابية في محافظة الرقة عزولتين من أصل 29 نعجة مجهضة تم دراستها أي بنسبة 6.9% ، في حين لم نجد في محافظة الحسکة أي عزولة إيجابية من 31 نعجة. أما في دير الزور فقد وجد عزولتين ايجابيتين من أصل 37 نعجة مجهضة تم دراستها أي بنسبة 5.4% و تبين من خلال مقارنة النتائج مع ظروف التربية أن 4 عزولات ايجابية عزلت من الأغنام المرباة بشکل طليق أي بنسبة 26.66 %،11  عزولة ايجابية عزلت من الأغنام المرباة تربية مکثفة أي بنسبة 73.33%.

التحليل الاحصائي:

حسبت الفروقات المعنوية باستخدام اختبار بيرسون مربع کاي ((Pearson's chi square وقد تم التحليل الإحصائي باستخدام نظم التحليل الأمريکي.ولم تکن هناک فروقات معنوية بين معدل الإجهاض الذي تشترک به المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية في کل من حلب والرقة ودير الزور بينما کانت هناک فروقات معنوية واضحة بين کل من حلب والحسکة (p=0.00000) و بين الرقة والحسکة (p=0.0003) أما بين الحسکة ودير الزور کانت هناک فروقات بسيطة (p=0.0011). کما وجد فروقات معنوية واضحة بين العزولات الإيجابية المسجلة في قطعان التربية الطليقة (السرحية) والتربية المکثفة (p=0.00000).

DISCUSSION

المناقشة

 تبين أن 15 عزولة أبدت نتائج ايجابية للمقوسة  الجنينية من أصل 202 عينة أي بنسبة 7.4 %. وقد کانت نتائج الدراسة متوافقة مع الدراسة التي أجريت في المنطقة الجنوبية من ترکيا حيث وجد أنه من أصل  100عينة جنين مجهض کان هناک 7 عزولات ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أي نسبة 7% ((Yesilmen and Gul, 2007. وقد توافقت نتائج هذه الدراسة مع نتائج الدراسة الحالية نظراً  لقرب مناطق الدراسة من بعضها. ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي أظهرت أنه من أصل 124 عينة جنين مجهض کان هناک 15 عزولة ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أي بنسبة 12% (Diker,1985). وتوافقت نتائج الدراسة مع الدراسة التي بينت انه من أصل 303عينات  لأجنة مجهضة  کان هناک  20عزولة ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أي بنسبة 6.6% Kenar et al.,1990)). کما توافقت نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أن مخاطر الإجهاض الناتج عن المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية في الولايات المتحدة يتراوح بين 5-17% (Hansen et al.,1990). ولم تتوافق نتائج الدراسة مع الدراسة التي وجدت أنه من أصل 110 عينات لأجنة مجهضة وجد أن هناک 5 عزولات ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أي بنسبة 4.5% .(Muz et al.,1999)ولم تتوافق مع الدراسة التي تم فيها فحص 35 جنين مجهض ووجد 5 عزولات ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أي بنسبة 14.2% (Kenarand Erganis,1990). ولم تتوافق مع الدراسة التي تم فيها عزل 4 عزولات ايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية من أصل 145 عينة جنين مجهض أي بنسبة 2.7% (Erdogan et al.,1993).کما أن نتائج الدراسة لم تتوافق مع الدراسة التي وجدت أن معدل الإجهاض الناتجة عن المقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية کانت 15.2% Latinoviç et al.,1985)). وقد تبين من خلال الدراسة وجود 4 عزولات ايجابية کانت من الأغنام المرباة بشکل طليق من أصل 15 عزولة ايجابية أي بنسبة 26.66 % ، بينما کان هناک 11 عزولة ايجابية من الأغنام المرباة تربية مکثفة من أصل 15 عزولة ايجابية أي بنسبة 73.33%.وقد کانت نتائج الدراسة متوافقة مع بحث أجري في بريطانيا وأثبت أن المرض يکون أکثر سوءاً عندما تکون التربية عالية الکثافة Mearns, 2007)). کما اتفقت مع الدراسة التي وجدت أن تربية الأغنام بشکل مرکز يؤدي إلى تلوث الحظائر أثناء مراحل الحمل المتأخرة وبالتالي يزيد فرصة الإصابة بالمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية Scott,2010)). واتفقت مع الدراسة التي أجريت في نيوزيلندا والتي أکدت أن الکثافة العالية للقطعان تساهم في ارتفاع معدلات إجهاض بالمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية أکثر من القطعان ذات الکثافة المنخفضة ((Quinlivan and Jopp, 1982.

CONCLUSIONS

الاستنتاجات

 -1أن النسبة العامة للعزولات الايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية في هذه الدراسة بلغت  / 7.4 % /  حيث أن نسبة العزولات الايجابية في محافظة حلب کانت /%10.5/ ، وفي محافظة الرقة /%6.9  / ، وفي محافظة دير الزور / %5.4 / ، في حين لم تسجل في محافظة الحسکة أي نتيجة ايجابية .

2 - سجلت أغلب العزولات الايجابية للمقوسة الجنينية تحت نوع الجنينية في الأغنام المرباة بطريقة التربية المکثفة.

REFERENCES

المراجـع

Baron, E.J.; Peterson, L.R. and Finegold, B.M. (1994): Baily and scott's Diagnostic Microbiology.9th Ed. Mosby, St. Louis Baltimore.

Bryner, J.H.; O'Berry, P.A. and Frank, A.H. (1964): Vibrio infection of the digestive organs of cattle .Am. J. Vet. Res., 25: 1048-1050.

Butzler, J. (1984): Campylobacter Infection in Man and Animals. CRC Press, Inc. Boca Raton, FL.

Dasti, J.I. (2007): Identification and characterization of campylobacter jejuni factors relevant for the infection process ph.D. Thesis, George August University, Germany.

Diker, K.S. (1985): Studies on the identification of Campylobacter species isolated from sheep and cattle. Doga Bilim. Derg. 9, 232-240.

Dyre, N.W. (2008): Diagnosis of Ovine Abortion – Getting the Most Out of Your Diagnostic Laboratory. Sheep Research Report: 13-14.

Erdogan, I.; Gurel, A.; Tekin, C.; Uyanýk, F. and Bitgel, A. (1993): The determination and distribution of bacterial abortus in goats, cow and sheep in Thrace region. J. Pendik Vet. Microbiol. 24, 23-35.

Fox, J.G. (1982): Campylobacteriosis: a “new” disease in laboratory animals. Lab Anim Sci, 32: 625–637.

Franco, D.A. (1988): Campylobacter species: considerations for controlling a foodborne pathogen. J. Food. Prot. 51: 145–153.

Friedman, C.R.; Neimann, J.; Wegener, H.G. and Tauxe, R.V. (2000): Epidemiology of Campylobacter jejuni infections in the United States and other industrialized nations. In: Nachamkin I., Blaser M. J. Campylobacter. Washington: ASM Press; p. 121–39.

Grogono-Thomas, R.; Dworkin, J.; Blaser, M.J. and Newell, D.G. (2000):  Roles of the surface layer proteins of Campylobacter fetus subsp. fetus in ovine abortion. Infect Immun .68: 1687-1691.

Hansen, D.E.; Hedstrom, O.R.; Sonn, R.J. and Synder, P.S. (1990): Efficacy of a vaccine to prevent Chlamydia or Campylobacter induced abortions in ewes. JAVMA, 196, 731-734.

Hum, S.; Hornitzky, M. and Berg, T. (2009): Ovine Campylobacteriosis. Elizabeth Macarthur Agricultural Institute. Australia: 1-8.

Jensen, R.; Miller, V.A. and Molello, J.A. (1961): Placental pathology of sheep with vibriosis. American journal of veterinary Research22 (87)169-185.

Justin, S. and Luther, Ph.D. (2006): Abortions in Sheep Causes, Control and Prevention. NDSU Extension Sheep Specialis, AS-1317.

Kenar, B. and Erganis, O. (1990): Isolation and antibiotic susceptibility of Campylobacter spp. in aborted ovine fetuses in the central Black Sea. Veterinarium .5, 4-11.

Kenar, B.; Erganis O.; Kaya O. and Guler L. (1990): Bacteriological and serological survey on brucella, campylobacter, salmonella and chlamydia infections caused to sheep abortion in Konya region (central Anatolia) in Turkey. Veterinarium, 1, 17-20 (in Turkish).

Kudirkiene, A.; Malakauskas, A.; Serniene, L. and Malakauskas, M. (2008): Isolation and identifaction of thermophilic Campylobacter ssp. by PCR-RFLP in broiler flocks. Veterinarija IR Zootechnik, A. 42(64): 44-46.

Latinoviç, V.; Popovic, M. and Nevjestic, A. (1985): Privi slucajevi izolacije bakterija roda Campylobacter kod goveda i ovaca u Srbich. Veterinaria, Sarajevo. 34, 367-375.

Mc fadyean, J. and Stockman, S. (1913): Report of the Departmental committee appointed by the board of the Agriculture and Fisheries to inquire into Epizootic Abortion.part3.Abortion in sheep. London: HMSO.

Mearns, R. (2007): Campylobateriosis. pages131-132 In: Diseases of sheep ed, I. D. Aitken. Blackwell publishing, Oxford, U.K.

Muz, A.; Ertas, H.B.; Ongor, H.; Gulcu, H.B.; Ozer, H.; Eroksuz, H.; Dabak, M.; Basbug, O. and Kalender, H. (1999): Bacteriologic, serologic and pathologic studies on aborted cases of goats and sheep in Elazýð and it.s vicinity. Tr. J. Vet. Anim. Sci., 23, 177-188.

Park, C.E.; Smibert, R.M.; Blaser, M.J.; Vanderzant, C.; Stern, N. (1984): Campylobacter in: "Compendium of methodes for the Microbiological examination of food "2^nd Ed. Speck. M(ed) American public Health Association, Washington, D.C.

Quinliven, T.D. and Jopp, A.J. (1982): A survey on the incidence and cause of ovine abortion in Hawkes  Bay.Newzealand veterinary journal 30(5)65-68.

Scott, ph. (2010): Abortion in ewes. the National Animal Disease Information Service (Nadis). [Internet]. Available at: www. nadis. org. UK.

Sebald, M. and Veron, M. (1963): Teneur en bases de I’ADN et classification des vibrions. Ann. Inst. Pasteur (Paris) 105: 897-910.

Skirrow, M.B. (1977):Campylobacter enteritis: a “new” disease. Br. Med. J. 2:9–11.Smith, T.; Orcutt, M.L. (1927). Vibrios from calves and their serological relationto Vibirio fetus. J. Exp. Med. 45: 391-397. 

Smibert, R.M. (1974): Genus II. Campylobacter Sebald and Veron 1963, 907, p. 207-212. In R. E. Buchanan and N. E. Gibbons (ed.), Bergey's manual of determinative bacteriology, 8th ed. The Williams & Wilkins Co., Baltimore.        

Smith, T. (1918): Spirilla associated with disease of the fetal membranes in cattle (infectious abortion). J. Exp. Med. 28:701-719.

Yesilmen, S. and Gul, K. (2007): Isolation, identification and antibiotic susceptibility of campylobacter ssp. in aborted sheep fetuses medycyna wet.63 (10).