ISOLATION AND IDENTIFICATION OF MYCOPLASMA FROM CASES OF PNEUMONIA IN FEEDLOT LAMBS

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF MYCOPLASMA FROM CASES OF PNEUMONIA IN FEEDLOT LAMBS

M.A. HAMAD and Z.M. AL-JUMAA

Department of Microbiology, College of Veterinary Medicine, University of Musol, Mosul, Iraq

E-Mail: sandyz85@ymail.com

عزل وتشخيص المايکوبلازما من حالات ذات الرئة في حملان التسمين

محمد علي حمد ، زهراء مصطفى الجمعة

E-Mail: sandyz85@ymail.com

تضمنت الدراسة الحالية عزل وتشخيص المايکوبلازما بوصفها کأحد مسببات التهاب الرئة اللا نمطي في حملان التسمين . تم جمع (180) عينة من حملان کانت تعاني سريريا من علامات ذات الرئة خلال الفترة من تشرين الأول 2013 ولغاية آذار 2014 وقد شملت هذه العينات (60) مسحة أنفية و (60) مسحة رغامي و (60) عينة رئة مصابة. زرعت العينات في الوسط الانتقائي الخاص بتنمية المايکوبلازما Mycoplasma Broth Base  وحضنت هوائيا بدرجة حرارة 35 مْ لمدة 4- 14 يوم. بعد ظهور العکارة أخذت نقلة جرثومية وزرعت على وسط Mycoplasma Agar Base medium ثم حضنت بدرجة حرارة 35مْ لمدة 7-14 يوم داخل ناقوس الشمعة. وللکشف عن نمو المايکوبلازما على الوسط الصلب الخاص بها وتشخيصها بالاختبارات الشکلية والفحوصات الکيمياحياتية. سجلت النتائج من خلال تغير لون الوسط ثنائي الطور للکشف عن تخمر الکربوهيدرات وقدرة المايکوبلازما على الاصطباغ بصبغة دينيس وقدرتها على اختزال مادة التترازوليم وتحليل کريات الدم الحمراء وملاحظة مظهر البيضة المقلية المميز لمستعمراتها. أظهرت نتائج الدراسة ان النسبة المئوية الکلية لعزل المايکوبلازما من العينات المجموعة بلغت 49.4% وکانت أعلى نسبة عزل من المسحات الأنفية 58% بينما بلغت نسبة العزل من مسحات الرغامي 55,3% وعينات الرئات المصابة 35%.                                                                                                                                

INTRODUCTION

المقدمـة

يعد مرض ذات الرئة في الحملان من الأمراض المهمة الواسعة الانتشار في کثير من بلدان العالم ، ويؤدي إلى خسائر اقتصادية کبيرة لما يسببه من هلاکات عالية في الحيوانات المصابة ، والانخفاض الکبير في وزن جسـم الحيـوان المصاب ، وسرعـة انتـشـار المرض بالمـلامسـة بيـن قطعـان الحيوانـات مؤديـــاً بذلک إلى ارتـفـاع تکاليـف التربيـة والجهـد المـبذول فـي الإدارة والتربيـة والعــلاج للسيطــرة علـى هــذا المـــرض. (Nicholas et al., 2008; Kilic et al., 2013). وتعتبر حملان التسمين مصدر مهم لإنتاج البروتين الحيواني حيث تحتل الصدارة بالنسبة للثروة الحيوانية والإنتاج الحيواني في العراق وتکون اکثر حساسية للإصابة بهذا المرض مع نسب إصابة وهلاکات عالية جداً خصوصاً إذا تزامنت مع ظروف التربية غير الجيدة (رحيمة وجماعته.,2001) تشکل الأمراض التنفسية وذات الرئة من أکثر الأمراض المهمة والتي تسبب خسائر اقتصادية کبيرة في الضان نتيجة الإصابات والهلاکات العالية ، وقد أشارHealy  ,(1993) إلى ان نسبة الإصابة بالأمراض التنفسية تصل إلى 69% من مجموع الأمراض التي تصاب بها الأغنام وتشکل حالات ذات الرئة نسبة 75% من هذه الأمراض التنفسية. کما أن المسببات المرضية لحالات ذات الرئة متنوعة وعديدة و تشمل اغلب الجراثيم المرضية ، من أهمها المايکوبلازما (Nicholas et al., 2001). وتعد المايکوبلازما من الکائنات الحية الواسعة الانتشار في العالم ، إذ يضم هذا الجنس أکثر من 102 نوع. تصيب هذه الجراثيم الإنسان والحيوان ومنها المجترات وبخاصة الأغنام والأبقار مسببة العديد من الأمراض المعدية ومنها الأمراض التنفسية مثل ذات الرئة (Nicholas and Ayling 2003)إذ تسبب ذات الرئة الخلالي المزمن chronic proliferative interstitial pneumonia , التهاب ملتحمة العين conjunctivitis والتهاب الضرع mastitis في الأغنام والماعز. کما انه من الممکن عزلها من الرئة lung, القصبة الهوائية trachea, الأنف nose, الملتحمة conjunctivae للأغنام المصابة (Nicholas and Ayling et al., 2003; Sheehan et al., 2007). إن المايکوبلازما عبارة عن کائنات صغيرة بدائية النواة محاطة بغشاء بلازمي فقط غير قادرة على تخليق الببتيدو کلايکان أو احد لبناتة precursors  لذا يکون اصطباغها بصبغة جرام ضعيفا حيث تظهر سالبة الجرام متعددة الأشکال اکبر حجماً من الفيروس واصغر من البکتيريا لافتقارها للجــدار الخلــوي، ولهـا القــدرة على التضــاعف الذاتــي        self-proliferation . (Quinn et al., 2002). تکون هذه الجراثيم صعبة العزل اذ تحتاج إلى أوساط مغنية والستيرول في النمو لذا يضاف المصل إلى الأوساط الغذائية بوصفه مصدرا للستيرولات, کما أن لها القدرة على تخمير الجلوکوز وإنتاج حامض, وتکون حساسة للحرارة والجفاف ,بينما تنمو جيدا تحت الظروف الهوائية ودرجة حرارة (35-37م°) وتحتاج إلى دالة حامضية قدرها (PH 7.8). ومن أهم الاختبارات المميزة المستعملة في تشخيصها اختبار اختزال التترازوليوم واختبار القدرة على تحلل کريات الدم الحمر واختبار الکاتاليز. (Koenman et al., 1997). نظرا لأهمية المايکوبلازما في إحداث نسبة عالية من حالات ذات الرئة في الحملان ولقلة الدراسات عليها  في العراق بشکل عام وخصوصا المايکوبلازما التنفسية المعزولة من الحملان لذا أجريت هذه الدراسة لعزل المايکوبلازما من حالات ذات الرئة في حملان التسمين.

MATERIALS and METHODS

مـواد وطرائق العمل

جمع العينات

تم جمع (180) عينة للفترة من تشرين الأول 2013 ولغاية آذار 2014 توزعت العينات کالآتي:

1-  (60) مسحة أنفية مأخوذة من حملان کانت تعاني من علامات تنفسية.

2-  (60) مسحة رغامي أخذت أيضا من نفس الحملان المصابة, وذلک بإدخال المسحات القطنية إلى داخل التجويف الأنفي وبداية الرغامي وبعدها وضعت المسحات القطنية داخل انابيب زجاجية حاوية على المرق الخاص بتنمية المايکوبلازما.

3-  (60) عينة رئة ظهرت عليها آفات وعلامات الإصابة بذات الرئة, جمعت من مجزرة الموصل ومحلات القصابة في مناطق مختلفة من مدينة الموصل, حيث أخذت العينات من مکان الآفة الظاهرة على الرئات المصابة وزرعت في المرق الخاص ونقلت العينات إلى مختبر البحوث الجرثومية التابع لفرع الأحياء المجهرية في کلية الطب البيطري.

الأوساط الزرعية

وسط ازرق المثيلين – جلوکوز الثنائي الطور    Methylen Blue – Glucose Diphasic Medium

وسط ثنائي الطور يستخدم في عزل جرثومة المايکوبلازما وتشخيصها يتکون من طور صلب يعلوه طور سائل في القنينة ذاتها ، تم تحضيره في المختبر (Koneman et al., 1997) وکما يأتي:

1-   الطور الصلب Mycoplasma agar  

 حضر من نقيع المخ والقلب (50 غم) ببتون (10 غم)  کلوريد الصوديوم (5 غم)  الاجار المصلب (14 غم). اذيبت مکونات الوسط في لتر من الماء المقطر . ووزع الوسط في دوارق زجاجية يحتوي کل منها على ( 70 ) مل وعقم الوسط بالمؤصدة وبعد تبريده إلى ( 50 مْ) أضيفت إليه المواد الآتية :

أ- مستخلص الخميرة – المصل Yeast extract-serum (30 مل) المعاد تدفئته ، الذي تم تحضيره  في المختبر کالآتي :

- تم اذابة 0.5 غم من مستخلص الخميرة في 40 مل ماء مقطر وعرض المحلول لدرجة الغليان ثم برد الى درجة حرارة الغرفة ورشح باستخدام ورق الترشيح . ثم ضبطت الدالة الحامضية عند ( 8) باستعمال هيدروکسيد الصوديوم ( 1 عياري) وبالتالي عقمت خلاصة الخميرة بالترشيح .

- ولتحضير محلول الخميرة-المصل, اضيف مصل دم الخيول المعقم بالترشيح الى مستخلص الخميرة بنسبة ( 2:1 ) من المصل – خلاصة الخميرة وحفظ المزيج تحت التجميد بدرجة ( 20 - مْ) .

ب- محلول ازرق المثيلين ( 0.1 ) مل بترکيز 1%، محلول الفينول الاحمر ( 0.5 ) مل  بترکيز 0.4%، محلول الکلوکوز ( 2) مل  بترکيز 50%، محلول خلات الثاليوم ( 0.25 ) مل  بترکيز 10% و ( 3) مل من محلول البنسلين المعقم الحاوي على 100000 وحدة دولية/ مل.

بعد اضافة المواد المذکورة الى الطور الصلب ضبطت الدالة الحامضية عند ( 7.8 ) وزع الوسط الصلب في قناني معقمة وبواقع ( 1) مل لکل قنينة ثم ترک ليتصلب مع المحافظة على ظروف التعقيم.

2-   الطور السائل Mycoplasma broth  

حضر من المکونات التالية:

مرق نقيع القلب والمخ (50 غم) , ببتون (10 غم) , کلوريد الصوديوم (5 غم) اذيبت المکونات في لتر من الماء المقطر وعقم الوسط بالمؤصدة ومزج (140) مل من الوسط مع (60) مل من خلاصة الخميرة-المصل المحضر کما ورد في الطور الصلب وأضيفت إليه المحاليل التالية:

 محلول ازرق المثلين ( 0.2 ) مل بترکيز 1%، محلول الفينول الاحمر ( 1.0 ) مل بترکيز 0.4%، محلول الکلوکوز ( 4.0 ) مل بترکيز 50%, محلول خلات الثاليوم (0.5 ) مل بترکيز 10% و( 6 ) مل من محلول البنسلين الحاوي على 100000 وحدة دولية/ مل. ضبطت الدالة الحامضية للوسط عند ( 7.8 ) ووزع في قناني الطور الصلب وبواقع ( 2) مل لکل قنينة . (Koneman et al., 1997).

وسط Mycoplasma broth base (PPLO broth base)

يعد وسطًا أساسًا لعزل المايکوبلازما وتنميتها من النماذج السريرية بعد اغنائه بالمواد المضافة(المکملات)supplement  والتي تم ذکرها في تحضير الوسط ثنائي الطور (MB-GD) حضر الوسط بإضافة (21.0) غم من الوسط الى (700) مل ماء مقطر وسخن المزيج لحين الذوبان وعقم بالمؤصدة ثم برد لدرجة حرارة 45 مْ بعد ذلک أضيف له 2.85 مل من مادة potassium tellurite  بترکيز 1% المعقمة بالترشيح. أضيف (300) مل من خلاصة الخميرة- المصل المحضرة سابقا إلى وسط PPLO broth base المعقم.

وسط Mycoplasma agar base  (PPLO agar base)

حضر بإضافة (36.0) غم من وسط PPLO agar الى (700) مل من الماء المقطر سخن حتى درجة الغليان ثم ضبطت الدالة الحامضية عند 7.8 وعقم بالمؤصدة وترک ليبرد ومن ثم اضيفت اليه المکملات المعقم والمحضر کما ذکر آنفا (Koneman et al., 1997).

وسط Mycoplasma Glucose Agar medium

حضر في المختبر باعتماد (Koneman et al., 1997) وکما ياتي:

حضر ( 70 ) مل من Mycoplasma agar وأضيف إليه ( 30 ) مل من مستخلص الخميرة – المصل مزج جيدا ثم أضيفت إليه المحاليل الآتية مع مراعاة الحفاظ على ظروف التعقيم :-

محلول الکلوکوز ( 2) مل  بترکيز 50%، محلول خلات الثاليوم ( 0.25 ) مل بترکيز 10%،و 100000 وحدة دولية/ مل محلول البنسلين ( 3) مل مع ضبط الدالة الحامضية للوسط عند ( 7.8 ) ووزع في اطباق بتري معقمة ثم حفظ في الثلاجة إلى حين الاستخدام. ( Koneman et al., 1997).

الصبغات والکواشف والمحاليل

صبغة دينيس المحورة Modified Dennis Stain حضرت کما يأتي:

1-   تحضير Stock solution من الصبغة تم تحضيره من المواد الآتية:

(2.5) Methylen blue غم (1.25) Azure II , غم  (10.0)   Maltose ,غم , (0.25)   Na2Co3 غم ,  ماء مقطر 100 مل.

2- محلول Working solution من الصبغة:

حضر بتخفيف المحلول (1) بالماء المقطر بإضافة ثلاث أحجام من الماء المقطر إلى حجم واحد من المحلول (1) (Koneman et al., 1997).

المواد الاخرى

صبغة کمزا ، دارئ الفوسفات الملحي ، ازرق المثيلين ، محلول الفينول الأحمر ، محلول الجلوکوز ، محلول خلات الثاليوم ، محلول البنسلين محلول 2-(p-iodo phenyl) -3-nitrophenyl -5-phenyl tetrazolium chloride. حضرت کما ورد في (Koneman et al., 1997).

طرائق العمل

1- زرع العينات:

زرعت مسحات الأنف ومسحات الرغامي مباشرة في المرق الخاص بالمايکوبلازما ووضعت بالحاضنة لمدة 4-14 يوم  بدرجة حرارة 35 مْ مع توفير الرطوبة اللازمة.

أخذت قطع من الرئات المصابة من مکان الآفة ووضعت مباشرة بالمرق الخاص بالمايکوبلازما وحضنت کالسابق  وبعد ذلک زرعت على وسط Mycoplasma Agar base Medium وحضنت لمدة7- 14 يوم  بدرجة حرارة 35 مْ داخل ناقوس الشمعة.

2- الاختبارات التشخيصية لجرثومة المايکوبلازما:

1- الاختبارات الشکلية  وتشمل:

الشکل المستعمري : Colony morphology

درست الصفات الشکلية وخصائص المستعمرات من خلال نموها على وسط Mycoplasma  Agar Medium بعد انتهاء مدة التحضين باستخدام المجهر التشريحي.

الفحص المجهري : microscopic appearance

حضرت مسحات من الأوساط الزرعية الملقحة بالمايکوبلازما وصبغت بصبغة کيمزا وفحصت بالمجهر الضوئي باستخدام العدسة الزيتية لملاحظة أشکال المايکوبلازما .

2- صبغة دينيس

اعتمدت صبغة  دينيس من قبل ( Koenman et al., 1997) لصبغ المستعمرات اذ غمر سطح طبق الاکار الحاوي على المستعمرات ب (1) مل من صبغة دينيس Dennis stain working solution وغسلت بالماء المقطر ثم أضيف ( 1) مل من ( 95 %) من الکحول الاثيلي للقصر وترک مدة دقيقة واحدة ثم أزيل الکحول الزائد وکررت عملية الغسل بالماء المقطر وفحصت مستعمرات المايکوبلازما من حيث اللون .

3- الاختبارات الکيمياحياتية:

اختبار اختزال التترازوليم Tetrazolium reduction test

غمر سطح الطبق النامية عليه المستعمرات ب ( 2) مل من کاشف التترازوليم وحضن بدرجة ( 35 مْ) مدة ( 30-60 دقيقة)  .

اختبار تخمر الکاربوهيدرات

استخدم الوسط MB-GD medium)) الثنائي الطور الحاوي على الجلوکوز وازرق المثيلين والفينول الأحمر لإجراء اختبار تخمر الکاربوهيدرات.

اختبار القدرة على تحليل الدم

أضيف (5 %) من دم الأغنام إلى وسط Mycoplasma agar base المضاف له المکملات Supplement کما في السابق

ثم وزع في أطباق بتري معقمة ولقح بالجراثيم تحت الاختبار وحضنت الأطباق هوائيًا بدرجة ( 35مْ) مدة ( 5-7 أيام) .

RESULTS

النتائــج

1-   الشکل المستعمري

تبين من خلال دراسة الصفات الشکلية وخصائص المستعمرات نمو المايکوبلازما على وسط  (PPLO agar) إذ ظهرت مستعمرات کروية ذات مرکز محاط بهالة بيضاء إلى عديمة اللون شبيهة بالبيض المقلي وکما موضح في الصورة (1).

2- الفحص المجهرى

تميزت العينات الموجبة لصبغة کيمزا بظهور خلايا المايکوبلازما بلون بنفسجي وظهرت بأشکال مختلفة highly pleomorphic تراوحت بين الکروية والعصوية والخيطية والمتفرعة کما موضح في الصورة (2) لعدم احتوائها على الجدار الخلوي.

3- صبغة دينيس

 أوضحت نتائج استخدام صبغة دينيس ظهور مستعمرات المايکوبلازما النامية على وسط PPLO agar عديمة اللون وذلک لقدرتها على اختزال ازرق الميثيلين الموجود في ترکيبة صبغة دينيس وظهور مستعمرات عديمة اللون کما في الصورة (3).

4- اختبار اختزال التترازوليم

عند إجراء الاختبارات الکيمياحياتية للتاکد من نوع الجرثومة أظهرت نتائج اختبار اختزال التترازوليم المبينة في الصورة (4) أن مستعمرات المايکوبلازما تحت الاختبار ظهرت باللون الأحمر.

5- اختبار تخمر الکربوهيدرات

لوحظ قدرة المايکوبلازما على تخمير الکربوهيدرات بتحول الطور الصلب إلى اللون الأصفر والطور السائل إلى اللون الأخضر کما موضح في الصورة (5).

6- اختبار القدرة على تحليل کريات الدم الحمر

أظهرت النتائج قدرة المايکوبلازما النامية على اجار الدم على تحلل الدم وظهور مناطق شفافة حول المستعمرات النامية نتيجة لقدرتها على إنتاج بيروکسيد الهيدروجين والذي بدوره يوثر على أغشية الخلايا ويحطمها.

7- انتاج الکاتاليز

أظهرت المايکوبلازما النامية نتيجة موجبة لهذا الفحص.

8- نسب العزل الجرثومي

بينت نتائج الدراسة بعد إجراء جميع الاختبارات التأکيدية أن نسبة عزل المايکوبلازما من مجموع العينات کانت (49.4%) وقد ظهرت المايکوبلازما بأعلى نسبة عزل في المسحات الأنفية وبنسبة (58%) تلتها مسحات الرغامي والرئات المصابة وبنسبة (55.3%, 35%) على التوالي.

الصورة (1)

المستعمرات المجهرية ذات المظهر المميز (مظهر البيضة المقلية) تحت المجهر التشريحي

الصورة (2)

مسحة رغامي مباشرة مصبوغة بصبغة کيمزا تتضح فيها النتيجة الموجبة لوجود المايکوبلازما وظاهرة تعدد الأشکال

لخلايا المايکوبلازما.

الصورة (3)

النتيجة الموجبة لاختزال صبغة دينيس وظهور مستعمرات عديمة اللون

الصورة (4)

اختبار اختزال التترازوليوم وظهور المستعمرات باللون الأحمر

الصورة (5)

النمو في الوسط ثنائي الطور

ا- النتيجة الموجبة لنمو المايکوبلازما

ب- النتيجة السالبة

                                                                         (ب)                                       (أ)

جدول 1: أعداد وأنواع ونسب العينات التي تم جمعها خلال فترة الدراسة.

DISCUSSION

المناقشة

إن الأمراض التنفسية وذات الرئة من أکثر الأمراض المهمة  والتي تسبب خسائر اقتصادية  کبيرة في الضأن نتيجة الإصابات والهلاکات العالية وقد أشارت إحدى الدراسات إلى أن نسبة الإصابة بالأمراض التنفسية تصل إلى (69%) من مجموع الأمراض التي تصاب بها الأغنام وتشکل ذات الرئة نسبة (75%) من هذه الأمراض التنفسية (Healy et al., 1993) , وتعتبر المايکوبلازما من المسببات الرئيسية للأمراض التنفسية في الحملان(Pitcher and Nicolas 2005) .

أظهرت نتائج الدراسة الحالية ان المستعمرات النامية کانت نموذجية ومطابقة للمستعمرات الخاصة بالمايکوبلازما عند تنميتها على وسطPPLO agar  إذ ظهرت بشکل مستعمرات کروية ذات مرکز محاط بهالة شفافة شبيهة بمظهر البيضة المقلية Fried egg appearance  وهذا مشابه لما مذکور في المراجع العلمية (Koenman et al., 1997; Quinn et al., 2002; Nester et al., 2004; Prescott et al., 2005). وأشارت نتائج الفحص المجهرى للمسحات المحضرة من الزروع النامية والمصبوغة بصبغة کيمزا ظهور الجرثومة بأشکال متعددة (highly pleomorphic) ويعزى هذا إلى افتقارها إلى الجدار الخلوي مما يجعلها مطاطية وهشة وليس لها شکل ثابت (Nester et al., 2004). بينما ظهرت المايکوبلازما النامية على وسط Modified PPLO agar  والمصبوغة بصبغة دينيس مستعمرات عديمة اللون لقدرتها على اختزال ازرق الميثيلين الذي يعد احد مکونات صبغة دينيس وهذا مطابق لما ورد في انظمة التشخيص المعتمدة من قبل(Koenman et al., 1997)  . أما نتائج الاختبارات الکيماحياتيـة للتأکـد من نوع الجرثومة اختبر اختزال التترازوليـم حيث أن مستعمرات المايکوبلازما ظهرت باللـون الأحمر وهذا مطابـق لما توصل إليـه کـل من (النعيمي ؛ 2001 ؛  الاغا ؛ 2012) ويـعـود السبـب إلـى قدرتـها على اخـتزال مـرکب 2-(P-iodophenyle)-3-nitrophenyle-5-phenyle tetrazolium chloride.  العـديـم اللـون إلى مرکب غيـر ذائـب يتـرسـب داخل خلايـاهـا ليغيـر لـون المستعمـرة إلـى اللـون الأحمـر وهــو مـرکـب الفـورمـازان (Formazan). أمـا اختبــار تخمـر الکربوهيـدرات باستخـدام الوسـط ثنـائي الطــور (Methylen Blue-Glucose Diphasic medium)  فقد أدى إلى ظهور الطور الصلب باللون الأصفر أما الطور السائل فکان باللون الأخضر وهذا يتفق مع النتائح التي تم التوصل إليها من قبل کل من (النعيمي ؛ 2001 ؛ الاغا ؛2012) وذلک لان المايکوبلازما لها القدرة على استهلاک الجلوکوز الموجود في الوسط الغذائي وإنتاج الحامض الذي بدوره يقلل الدالة الحامضية للوسط ويؤدي إلي تحول لون الفينول الأحمر من الأرجواني إلى اللون الأصفر وفي الوقت ذاته يختزل الميثيلين الأزرق من قبل المايکوبلازما ويصبح عديم اللون إذ يلحظ تغير لون الطور السائل من اللون الأرجواني إلى اللون الأخضر أو الأخضر المصفر فيما يتحول لون الطور الصلب من الارجواني إلى اللون الأصفر أو الأصفر البرتقالي (Koenman et al., 1997). کذلک درست نتائج الاختبارات الکيمياحياتية الأخرى مثل اختبار انزيم الکتاليز حيث کونت مستعمـرات المايکوبلازما فقـاعات بعـد إضافـة قطرة مـن بيروکسيد الهيـدروجيـن (H2O2) 3% إلـى جزء من المستعمرة المنقـولـة على سطـح شريحـة زجاجيـة (; Atlas et al.,1995 النعيمي ؛2001 ؛ الاغا., 2012) إذ يعمل إنزيم الکتاليـز على تحويـل بيروکسيد الهيدروجين إلى أوکسجين ومـاء. واستخدمـت اختبارات تشخيصية أخـرى مثـل اختبار تحليل کريات الدم الحمراء والتي تمثلت بظهور مستعمرات محاطة بنطاق رائق من التحلل الدموي دلالـة على قـدرتها علـى تحـلل الدم تحلـلا کاملا والذي يعود إلـى إنتـاجها H2O2  الـذي يعمل على تحطيم الأغشيـة الخلويةWilley et al., 2008)  ؛ الاغا ؛ 2012).

وقد أشارت نتائج الدراسة الحالية إلى عزل (89) عزلة مايکوبلازما من مجموع العينات البالغ عددها (180) عينة وبنسبة عزل کلية (49.4%), وعند دراسة توزيع النسب المئوية لعزل المايکوبلازما حسب نوع العينة فقد سجلت مسحات الأنف أعلى نسبة عزل للمايکوبلازما (58%) تلتها مسحات الرغامي (55.3%) وعينات الرئات المصابة (35%) وقد يعزى هذا السبب الى دور الحواجز التشريحية واليات الدفاع الطبيعية في تقليل أعداد الجراثيم التي تصل إلى المجرى التنفسي السفلي. حيث کانت نسبة عزل المايکوبلازما من مسحات الأنف مقاربة نسبيا لنتائج الدراسة التي أجراها Ongor  , (2011) للتحري عن وجود المايکوبلازما من 692 عينة إفرازات أنفية فقد بلغت نسبة العزل لديه (41%) من جموع العينات الکليOngor et al., 2011) ). في حين لم تتفق هذه النسبة مع ما توصل إليه باحثون في شمال الأردن حيث تم عزل المايکوبلازما من 7 مسحة أنفية من مجموع 310 مسحة أنفية تم جمعها من أغنام وحملان کانت تعاني من علامات تنفسية بنسبة عزل (2.3%) وقد يعود السبب إلى نوع العينة المأخوذة للزرع أو الظروف المستخدمة في العزل وتاريخ الحالة المرضية (case history) وفترة جمع العينات خلال مدة الدراسة (Momani et al., 2006). حيث يعتبر عزل المايکوبلازما من أصعب المهمات التي يمکن إجرائها في المختبرات التشخيصية وذلک لصعوبة تنميتها على الأوساط المختبرية الاعتيادية واحتياجها إلى ظـروف تنمية خاصة والى إضافات معينة لتحسين النمـو (Bidhendi et al., 2011). أما عينات الرئات المصابة فـقـد اتفقــت الـنسـب المئويـة للـعـزل التـي تـم التوصـل إليها في دراستنا مـع مـا توصل إليـه باحثـون فــي ترکيـا (Kilic et al., 2013) حيث تم عزل المايکوبلازما من 80 عينة من مجموع 216 رئة مصابة تظهر عليها علامات ذات الرئة وکانت النسبة (37%), في حين کانت نسبة العزل اقل في دراسة مشابهة اجريت على 200 رئة أغنام وحملان مصابة بذات الرئة حيث بلغت نسبة العزل لديهم (13.5%) من الحالات ( Erkin N., 2004). أما عند مقارنة ما توصلنا إليه مع دراسة أجريت على رئات مصابة جمعت من المجزرة إذ أظهرت نتائجنا انخفاضا ملحوظا في نسبة العزل مع نتائج هذه الدراسة التي بلغت فيها نسبة العزل (90%) (Sheehan et al., 2007) بينما کانت نسبة العزل التي توصلنا إليها (35%) من الرئات المصابة.

إن الدراسة الحالية أثبتت إمکانية عزل جراثيم المايکوبلازما من المسحات الأنفية ومسحات الرغامي وعينات الرئات المصابة وبنسب عالية مما يستوجب الانتباه إلى ارتفاع نسب الإصابة بالمايکوبلازما في الحملان في الزمن الحاضر , وأيضا يجب مراعاة تقليل عوامل الإجهاد ومحاولة السيطرة على الإصابات المرضية التي قد تهيئ الحملان للإصابة بالأمراض التنفسية بشکل عام والمايکوبلازما بشکل خاص.

شکر وتقديـر

يتقدم الباحثان بالشکر والثناء لکلية الطب البيطري, جامعة الموصل لدعمها المادي والمعنوي لانجاز البحث.

REFERENCES

المراجــع

الآغا ، يسرى يحيى قاسم ، (2012): "دراسة مصلية وزرعيه لمسببات ذات الرئة اللانمطي لدى الأطفال ". أطروحة دکتوراه ، کلية العلوم - قسم علوم الحياة، جامعة الموصل.

النعيمي, نجلاء عبد الله (2001): "دراسة في تقييم دور مجموعة من الجراثيم الموجبة والسالبة لصبغة کرام وجرثومة Mycoplasma pneumonia  في الإصابات التنفسية لدى الأطفال الحديثي الولادة في مدينة الموصل". رسالة ماجستير, کلية العلوم – قسم علوم الحياة. جامعة الموصل.

رحيمة ، ماجد شيال ، شمعون، جورجيت نيسان ، قاسم ، الهام عبد الغني (2001): المسببات المرضية لذات الرئة في حملان التسمين. المجلة العراقية للعلوم البيطرية , المجلد14 , العدد 1 , الموصل , العراق .

Atlas, R.M.; Brawn, A.E. and Parks, L.C. (1995): Laboratory Manual of Expermental Microbiology (2^nd ed.). Mosby-Year Book, Inc. USA.

Bidhendi, M.; Khaki, S. and Langroudi, P.R. (2011): Isolation and identification of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction in sheep and goat milk samples in Kordistan Province, Iran. Razi Institute, vol. 66, No. 1.

Erkin, N. (2004): The isolation and identification of Mycoplasma species in sheep and lambs that indicates pneumonia in Samsun rejoin. M.Sc. Thesis, Samsun Veterinary Control and Research Institute.

Healy, A.M.; Monaghan, M.L. and Basset, H.F. (1993): Morbidity and mortality in large irish feedlot, Microbiological and serological finding in lambs with acute respiratory disease. British. Vet. J. 149:        539-560.

Kilic, A.; Kalender, H.; Eroksuz, H.; Muz, A. and Tasdemir, B. (2013): Identification by culture, PCR, and immunohistochemistry of mycoplasmas and their molecular typing in sheep and lamb lungs with pneumonia in Estern Turkey 10: 013-0394.

Koenman, E.W.; Allen, S.D.; Janda, W.M.; Schreck enberger, P.C. and Winn, W.C. (1997): Colar atlas and text book of diagnostic Microbiology. (5^th ed.) Lippincot-Raven publisher, Philadelphia, USA.

Momani, A.W.; Halab, M.A.; Aboshehada, M.N.; Mieles, K.; McAuliffe, L. and Nicholas, R.A.J. (2006): Isolation and molecular identification of small ruminant Mycoplasma in Jordan, small Ruminant Research. 65:   106-112.

Nester, E.W.; Anderson, D.G.; Jr., CER.; Pearsall, Pearsall, N.M. and Nester, M.T. (2004): Microbiology.(4^th ed.)., McGraw-Hill Companies, Inc. USA.

Nicholas, R.A.J.; Ayling, R.D. and McAuliffe, L. (2003): A Text Book of the Mycoplasma Diseases of Ruminants, CABI is a trading name of CAB International, www.cabi.org ., Pp. 132-168.

Nicholas, R.A.J.; Ayling, R.D. and Loria, G.R. (2008): Ovine Mycoplamal infections. Small Ruminant Research, 76, 92-98.

Nicholas, R.A.J.; Wood, E.; Baker, S. and Ayling, R.D. (2001): Mycoplasmas isolated from ruminants in Britain 1995-2000. In: Poveda, J.B., Fernandez, A., Frey, J., and Johansson, K.E. (eds.). Mycoplasmas of Ruminants: Pathogenicity, Diagnostics, Epidemiology and Moleculargenetics. Vol.5. European Commission, Brussels. pp. 116-120.63.

Ongor, H.; Kalin, and MN Acik, (2011): Detection of Mycoplasma ovipneumoniae from goats with nasal discharge by culture and polymerase chain reaction. Pak. Vet. J., 31(3): 244-248.

Pitcher, D. and Nicholas, R.A.J. (2005): Mycoplasma host specificity: fact or fiction? Vet. J., 170: 300–306.

Prescott, L.M. Harley, J.P. and Klein, D.A. (2005): Microbiology. Avenue of the Americas, New York. (6^th ed.) McGraw-Hill.Companies, Inc., USA.

Quinn, P.J.; Markey, B.K.; Carter, M.E.; Donnelly, W.J. and Leonard, F.C. (2002): Mycoplasmas. In: Veterinary Microbiology and Microbial Disease. 1st ed., Black Well Publishing. Pp: 189-195.

Sheehan, M.; Casidy, J.P.; Brady, J.; Ball, H.; Doherty, M.L.; Quinn, P.J.; Nicolas, R.A.J. and Markey, B.K. (2007): An Aetiopathological Study of Chronic Bronchopneumonia in lambs in Ireland. The Veterinary Journal, 173, 630-637.

Willey, H.C.; Sherwood, L.M. and Woolverton, C.J. (2008): Microbiology. (7^th ed.) McGraw Hill. USA.