SERO-COMPARATIVE STUDY OF RHINOPNUMINITIS (EQUINE HERPES SEROTYPES 1/4) IN SOME REGIONS OF NORTH, MIDDLE AND SOUTH OF SYRIA

SERO-COMPARATIVE STUDY OF RHINOPNUMINITIS (EQUINE HERPES SEROTYPES 1/4) IN SOME REGIONS OF NORTH, MIDDLE AND SOUTH OF SYRIA

HAZEM ALTAWEEL^*; ABDUL KARIM KAHLB ALLOZ^** and MUHAMAD ZUHIR ALAHMAD^***

^*Master in the Department of Animal Diseases - infectious diseases

^**Professor in the Department of Internal and Infectious Medicine and poultry

^***Doctor in the department of surgery and Obstetrics

Email: dr.hazem.taweel@hotmail.com

دراسة مصلية مقارنة لانتشار مرض الإجهاض الوبائي عند الخيل (القوباء الخيلية 1-4) في بعض مناطق سورية الشمالية والوسطى والجنوبية

حازم الطويل ، عبد الکريم قلب اللوز، محمد زهير الأحمد

Email: dr.hazem.taweel@hotmail.com

تم في هذه الدراسة استخدام تقنية الإليزا المطورة للکشف عن الأضداد النوعية للقوباء الخيلية في مناطق الدراسة وتحديد النمط المصلي للإصابة بأحد نمطي الفيروس المصليين (1 و 4) وذلک في عينات دموية جمعت من 145 خيل (حصان – فرس – مهر) غير ملقحة ضد المرض موزعة على ثلاث مناطق رئيسية في سورية وذلک باستخدام إختبار المقايسة المناعية الأنزيمية غير المباشرة (الإليزا غير المباشرة).

يعتبر النمط المصلي1 (EHV1) من الأمراض المجهضة للخيل کما أنه يسبب اضطرابات تنفسية وعصبية في حين أن النمط المصلي4 (EHV4) يکون مسئولا عن الاضطرابات التنفسية.

کانت نسبة الإصابة بالنمط1 (EHV1) في المنطقة الجنوبية بنسبة4% وفي المنطقة الوسطى بنسبة 8% أما في المنطقة الشمالية فکانت 2.2%  کما بينت الدراسة المصلية وجود إصابة بالنمط4 (EHV4) في المنطقة الجنوبية بنسبة 98% وفي المنطقة الوسطى بنسبة 88% أما في المنطقة الشمالية فکانت بنسبة 93.3%.

INTRODUCTION

المقدمـة

إن مرض التهاب الأنف والرئة المعدي أو مرض الإجهاض الوبائي الخيلي (القوباء الخيلية النمطين  EHV-1 و EHV-4) هو من الأمراض الحموية الخطيرة التي تصيب الخيول کما يعد هذا المرض العامل الرئيسي لظهور التهابات رشحية للأغشية المخاطية في الرأس مصحوبة بأعراض التنفسية وکذلک إجهاض الإناث الحوامل والاضطرابات العصبية والحمى ويسبب حدوث الالتهاب الرئوي الولادي عند الأمهار ونفوقها وکذلک حدوث الاعتلال الدماغي الشوکي عند الخيول في کل أنحاء العالم. وقد تم إثبات وجود هذا المرض منذ أکثر من 60 عاماً کمهدد لتربية الخيول العالمية (Allen and Bryans, 1986; Allen, et al., 1999; Bryans and allen, 1988; Crabb and Studdert, 1995and O’Callaghan et al., 1983)

ينتشر المرض في معظم دول العالم ويعد کمشکلة عالمية تهدد تربية الخيول في جميع أنحاء العالمMatumoto ورفاقه(1965) . وحسب Edington ورفاقه (1994) تأتي أهمية هذا المرض من الصفة التي يمتلکها العامل المسبب من خلال مرحلة الکمون التي تقوم بها الحمة داخل جسم الحيوان المصاب وعودة الأعراض بعد فترة من الشفاء.

ينتقل المرض عن طريق التماس المباشر بين الحيوانات المصابة والسليمة أو الحيوانات الحاملة للمرض. کما ينتقل عن طريق التماس غير المباشر بين الحيوانات المصابة أو الحاملة أو الناقهة والحيوانات غير المصابة وذلک عن طريق أدوات الحيوان والعلف والماء والتي تکون قد لوثت من قبل الحيوان المصاب. کما يمکن للعدوى أن تنتقل عن طريق أدوات الطبيب البيطري، ينتقل العامل المسبب أيضاً عن طريق السيلانات الأنفية والفموية (Doll and Bryans, 1963; Allen and Bryans, 1986).

وقد لوحظ أن العدوى الکامنة تعود للنشاط بعد تعرض الحيوان الذي يحمل الإصابة للإجهاد. والأفراس المصابة بعدوى کامنة تکون مصدراً لإصابة جنينها بالمرض وعندما يولد هذا المهر يصبح بدوره مصدراً للعدوى وذلک حسب Gilkerson ورفاقه 1997)). کما أن الإجهاد والعلاج بالستيروئيدات القشرية يؤدي أيضاً إلى تنشيط الحمة وعودة العدوى من جديد (Welch et al.,1992; Slater, 2007).

من أهم الأعراض التي تظهر على الحيوان الحمى حيث تصل درجة الحرارة إلى 40 م◦  Allen و (1989) Bryans والقهم (فقدان الشهية), (1974) Studdert  مع أعراض تنقسية بعد فترة حضانة تمتد من 3- 6 أيام من التعرض لمصدر العدوى على شکل إفرازات أنفية مخاطية تتحول إلى قيحية کما أن الخطر التالي للإصابة التنفسية يکون من خلال إجهاض الإناث الحوامل والإصابات العصبية المرکزيةحيث يحدث الإجهاض بعد فترة حضانة تمتد من 7 أيام إلى عدة أشهر (1989) Bryans, Allen .إن حمـة القوباء الخيليـة النمط 1 هي من أهم العوامل الممرضة واسعـة الانتشار من خلال إثارتها لعاصفـة من الإجهاضات أو الانتشـار الفردي عند الأفراس الحوامل وکذلک إحداث موت المواليد المبکر والإصابات التنفسية في الخيول الفتية وکذلک إحداثه للإعتلال الدماغي الشوکي

(Patel and Heldens, 2005; Reed and Toribio, 2004; Van Maanen, 2002).

 تجهض الأفراس الحوامل عادةً في الفترة بين 6 و 11 شهراً من الحمل حتى في حالة عدم وجود علامات سريرية أخرى للمرض وتحدث 95% تقريباً من حالات الإجهاض نتيجة للإصابة بالنمط 1 في الثلث الأخير من الحمل وفقا لکل من (1989) Bryans, Allen کما أشار کل منBorchers , Slater  (1993) أنه يتم تشخيص المرض حقلياً عن طريق مشاهدة الأعراض والصفة التشريحية أما التشخيص المخبري فيتم من خلال الفحص النسيجي مع عزل الفيروس من الأعضاء المتضررة (الکبد- الجنين المجهض- العقد البلغمية). يستخدم اختبار الـ PCR (Polymerase Chaine Reaction). أما التشخيص المصلي بطريقة الإليزا ELISA الکلاسيکية فقد أشار إليه  Duttaورفاقه (1983) واختبار تثبيت المتممة CFT وإختبار التألق المناعيIFT  حسب (1976) Thomson. تعد الإليزا المطورة طريقة يعتمد عليها ومفضلة بسبب الفائدة التطبيقية لهذا الإختبار وحساسيته بالمقارنة مع الاختبارات المصلية الأخرى

(Crabb and Studdert, 1993; Crabb and Studdert, 1995; Yasunaga et al., 2000; Hartley et al., 2005).

OBJECTIFS

أهداف البحث

1-        تحديد وجود مرض الإجهاض الوبائي عند الخيول والمعروف عالميا بالقوباء الخيلي (EHV-1 و EHV-4) في سورية.

2- تحديد نوع الأضداد في الخيول المدروسة المصابة بالقوباء الخيلية لکلا النمطين المصليين  للقوباء الخيلية 1/4 , وذلک باستخدام تقنية الإليزا المطورة.

3-       مقارنة الإنتشار المصلي للأضداد النوعية للقوباء الخيلية النمطين 1/ 4 في مناطق الدراسة.

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق العمل

في دراستنا هذه تم أخذ العينات من مزارع خيول متخصصة بتربية أفراس التکاثر ونوادي الخيل المتخصصة بتربية خيول القفز والرياضة المختلفة وخيول فردية في مزارع خاصة منتشرة على کافة منطقة الدراسة حيث بلغ عدد العينات 203 عينة.أخذت عينات دم باستخدام أنابيب مفرغة من الهواء، وخالية من أي مانع ثخثر، وذلک من 203 رأس من الخيول ( مهر – حصان – فرس حامل - غير حامل ) وقد کانت الخيول التي أخذت منها العينات في هذا البحث غير محصنة ضد مرض الإجهاض الوبائي عند الخيل (القوباء الخيلية النمطين EHV1/EHV4)  وتتراوح أعمارها بين 1 شهر حتى 23 سنة. معظم الخيول لم تبد أي أعراض مميزة للمرض عند جمع عينات الدم وأکدت القصة المرضية (تاريخ الحالة) لمعظم هذه الخيول وجود أعراض تنفسية شائعة عند کل خيول الدراسة وأعراض فردية إجهاضية سابقة عند عدد من الأفراس المدروسة وسجلت حالة عصبية وحيدة فقط. بعد جمع العينات، نقلت إلى المخابر المعنية حيث ثفلت وجني مصل الدم وأخضع لاختبار الأليزا الغير مباشرة.

اختبار المقايسة المناعية المرتبط بالإنزيم ELISA للکشف عن الإجهاض الوبائي الخيلي:

 استخدم کيت  SVANOVIR®وهو عبارة عن اختبار مقايسة مناعية مرتبطة بالإنزيم (ELISA)، من أجل الکشف عن الأضداد النوعية لحمة القوباء الخيلية النمطين EHV4/EHV1  وذلک لتحديد وجود الإصابة أو عدمها وکذلک التفريق بين الإصابة بالنمط EHV1 والنمط EHV4 . يتم الکشف عن هذه الأضداد النوعية في المصل والبلازما عند الخيول.

RESULTS

النتائــج

الانتشار المصلي للإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيل في المنطقة الجنوبية:

بلغت نسبة الإصابة عند الإناث 4.5% بالنمط المصلي (1) و 97.7% بالنمط المصلي (4) و (4%) بالنمطين المصليين (1/4) معاً من إجمالي الأفراس المختبرة والبالغ عددها 44 فرساً من أصل 50 رأساً في المنطقة الجنوبية، في حين بلغت نسبة الإصابة بالنمط المصلي (4) عند الذکور (6/6) 100% وکانت کلها سلبية للنمط المصلي (1). وقد تم تسجيل حالة إجهاض واحدة عند الأفراس المختبرة وکانت سلبية للنمط المصلي (1). کما بينت النتائج أن نسبة الإصابة بالنمط المصلي (4) کانت مرتفعة عند الإناث الحوامل بالمقارنة مع الإناث غير الحوامل.

الجدول رقم 1: الانتشار المصلي للحالات الإيجابية والمشتبهة ونسب الإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيول المختبرة في المنطقة الجنوبية من سورية.

الانتشار المصلي للإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيل في المنطقة الوسطى:

بلغت نسبة الإصابة عند الإناث 10% بالنمط المصلي (1) و 90% بالنمط المصلي (4) من إجمالي الأفراس المختبرة والبالغ عددها 40 فرساً من أصل 50 رأساً في المنطقة الوسطى، في حين بلغت نسبة الإصابة بالنمط المصلي (4) عند الذکور (8/10) 80% وکانت کلها سلبية للنمط المصلي (1). وقد تم تسجيل 5 حالات إجهاض واحدة إيجابية للنمط المصلي (1) وحالتان مشتبهتان وحالتان سلبيتان للنمط المصلي (1). کذلک بين الاستبيان وجود حالة عصبية وحيدة کانت إيجابية للنمط المصلي (1) کانت قد تعرضت لحالة إجهاض سابق وقد انتهت هذه الحالة بالنفوق.

الجدول رقم 2: الانتشار المصلي للحالات الايجابية والمشتبهة ونسب الإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيول المختبرة في المنطقة الوسطى من سورية.

الانتشار المصلي للإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيل في المنطقة الشمالية:

 بلغت نسبة الإصابة عند الإناث 4.8% بالنمط المصلي (1) و 85.7% بالنمط المصلي (4) من إجمالي الأفراس المختبرة والبالغ عددها 21 فرساً من أصل 45 رأساً في المنطقة الشمالية، في حين بلغت نسبة الإصابة بالنمط المصلي (4) عند الذکور (24/24) 100% وکانت کلها سلبية للنمط المصلي (1). تبين وجود حالة إجهاض واحدة کانت سلبية للنمط المصلي (1).

الجدول رقم 3: الانتشار المصلي للحالات الإيجابية والمشتبهة ونسب الإصابة بالحمة الحلئية الخيلية (1 و 4) عند الخيول المختبرة في المنطقة الشمالية من سورية.

التحليل الإحصائي للنتائج:

استخدمنا في التحليل الإحصائي لهذا المسح توزيع المعاينة للنسبة:

The Sampling Distribution of the Proportion

المنطقة الجنوبية:

(SEp1=0.03)(0 - 0.1 , CI 95%)

(SEp4=0.02)(0.94 - 1.0 , CI 95%)

المنطقة الوسطى:

(SEp1=0.04)(0 - 0.16 , CI 95%)

(SEp4=0.04)(0.82 -0.98 , CI 95%)

المنطقة الشمالية:

(SEp1=0.02)(0 - 0.06 , CI 95%)

(SEp4=0.04) (0.85 - 1.0 , CI 95%)

DISCUSSION

المناقشة

إن المسوحات السابقة للکشف عن المرض والتي استعانت بالاختبارات المصلية مثل إختبار تثبيت المتممة واختبار التعادل المصلي لم تفلح في تحديد نمط الإصابة الحموية لم تفرق بين الأضداد النوعية لکل نمط بسبب التفاعل التصالبي المستضدي للحمتين. وفي أواسط التسعينات تم تطوير نوع خاص من الإليزا لتشخيص الإصابة بين النمطين EHV1 و EHV4 يعتمد على تقنية جديدة تعتمد على اختلاف الجزء الطرفي (C) البروتيني من البروتين السکري (G) (C-terminal portion of glycoprotein G) لکلا النمطين الحمويين. وتعد الإليزا المطورة طريقة مفضلة يعتمد عليها بسبب الفائدة التطبيقية لهذا الإختبار وحساسيته بالمقارنة مع الاختبارات المصلية الأخرى

(Crabb and Studdert, 1993; Crabb and Studdert, 1995; Yasunaga, et al., 2000; Hartley et al.,2005)

 کما أکد Van Maanen ورفاقه (2000) أن الإليزا أکثر حساسية من اختبار التعادل المصلي حيث وجد تقارب شديد بين الاختبارين، غير أن الإليزا أکثر حساسية فإن المعايير القليلة کانت تظهر نتيجة إيجابية في اختبار التحدي لجرعة ضعيفة من المرض في الحيوانات الخالية من المرض کما أن الإليزا تحسست لارتفاع الأضداد النسبي عند التطعيم الثانوي في اختبار التحدي نفسه کما أن الإليزا أسهل وأسرع من اختبار التعادل وهو يعتبر أداة ثمينة في تشخيص المرض بالطرق المصلية.

وقد قام Yasunaga ورفاقه (1998) بإجراء مسح للتقصي عن المرض في اليابان بإستخدام طريقة الإليزا غير المباشرة المطورة التي تعتمد على الغليکوبروتين (glycoprotein Gs (gGs)) للنمط الحموي 1 والنمط 4 وباستخدام هذه الطريقة تم التفريق بين الإصابتين وهذه التقنية هي نفس التقنية التي استخدمت في هذا البحث وهي نفسها التي تم اعتمادها في الکشف عن المرض في ترکيا حسبAtaseven)  ورفاقه 2009Gür, 2008).

أظهرت الإختبارات المصلية نسب إصابة متقاربة بالنمط4 بين المناطق المدروسة، وقد سجلت أعلى نسبة للإصابة بالنمط 1 في المنطقة الوسطى حيث بلغت 8% وسجلت أقل نسبة إصابة في المنطقة الشمالية حيث بلغت 2,2% وبالمقابل سجلت أعلى نسبة إصابة بالنمط 4 في المنطقة الساحلية حيث بلغت 100%.

لقد کانت نتائج الإختبار مماثلة لتلک التي سجلت في الأبحاث التي جرت مسبقاً في دول مجاورة کتلک التي سجلت في مناطق قريبة من منطقتنا کترکيا فقد سيطرت الإصابة بالنمط 4 على معظم النتائج الإيجابية مصلياً حيث بلغت نسبة الإصابة الکلية في هذا البلد بهذا النمط 57% من مجموع خيول التجربة البالغ 188 عينة أما نسبة الإصابة بالنمط 1 فقد بلغت 3,7% من مجموع 188 عينة وذلک في سنة 2008  (2008 Gür).

وفي دراسة أخرى قام بها ( (2009Ataseven وجد أن نسبة الإصابة بالنمط 4 وصلت إلى 81% عام 2009 في ترکيا. أما في اليابان فقد بينت الدراسات أن النتائج الإيجابية مصلياً کانت کالتالي: 30/80 عينة إيجابية مصلياً بالنمط 1 و 9/80 عينة إيجابية مصلياً للنمط 4 وذلک عام 1995- 1996 وذلک حـسب  (1998 Yasunaga).

وحسب تقارير مکتب الأوبئة الدولي للعينات الواردة إلى المخابر کانت النتائج في الإمارات العربية المتحدة تم الاشتباه بثلاث حالات إصابة بمرض الإجهاض الوبائي تبين وجود حالة إيجابية واحدة بعد عمليات عزل الفيرس (2010 OIE) أما في جنوب إفريقيا فقد وصلت نسبة الإصابة بالمرض 6.77% من مجموع عينات مشتبه قدرها 325 عينة مشتبه بالمرض (2009 OIE) کما بنت تقارير مکتب الأوبئة الدولي نشر في موقع إلسيفر وجود حالات إيجابية في فلسطين المحتلة فقد تم إثبات أربع حالات إيجابية بالمرض من بين عشرين حالة مشتبه جمعت من عدة مناطق (intl.elsevierhealth.com/journals/trst) کما أکد Crabb ورفاقه (1997) أنه في إحدى الدراسات للتقصي باستخدام الإليزا المطورة عن القوباء الخيلية النمطين المصليين 1/4 کانت کل العينات إيجابية للنمط المصلي 4 وهذا ما يتوافق مع النتائج التي حصلنا عليها في هذه الدراسة.

وحسب دراسات أخرى قام بها   (Crabb and Studdert, 1993 ; 1994; Gilkerson et al., 1994; Van Maanen et al., 2000)، فإن النمط 1 يسبب إصابات مرضية أکثر خطورة من الإصابات التي يسببها النمط 4.

CONCLUSIONS

الاستنتاجـات

أن مرض الإجهاض الوبائي هو تطور للإصابة بحمة القوباء الخيلية النمط 1 الذي يترافق بإصابة تنفسية بداية ثم يتطور للإجهاض وقد يتطور للإصابة العصبية. وأن انتشار مرض الإجهاض الوبائي في سورية لا يزال محدوداً ولم تتعد نسبة الإصابة الکلية في جميع مناطق الدراسة الـ 3.5%. إن انتشار الشکل التنفسي غير الخطير کان مرتفعاً فقد وصلت نسبة الإصابة في بعض المناطق حتى 100%. وإن انتشار الشکل التنفسي للمرض کان نتيجة الصفات الخاصة التي يتمتع بها فيروس القوباء من حيث الإصابة الکامنة وسرعة الإنتشار. وقد توفرت بعض العوامل التي ساعدت على انتشار الشکل التنفسي ألا وهي انعدام إجراءات الأمن الحيوي في أغلب الإسطبلات التي تمت زيارتها والإفراط من قبل مربي الخيول في الاعتماد على الکلافين في إعطاء الأدوية بصورة عشوائية دون الاستعانة بالطبيب البيطري.

RECOMMENDATION

التوصيـات

- وضع هذا المرض على قائمة الأمراض الطارئة في المعابر الحدودية (نظام التحصين الأول).

- إتباع إجراءات الأمن الحيوي الصارمة لتفادي انتقال المرض و تقليل إجهاد الأفراس الحوامل المصابة أو المشتبهة لتفادي تطور المرض إلى الشکل الإجهاضي ومن ثم الشکل العصبي.

 إجراء دراسات متممة للبحث من حيث تقييم اللقاح المتوفر في بعض بلدان العالم.-

REFERENCES

المراجــع

ALLEN, G.P.; KYDD, J.H.; SLATER, J.D. and SMITH, K.C. (1999): Recent advances in understanding the pathogenesis, epidemiology, and immunological control of equid herpesvirus-1 (EHV-1) abortion. Equine Infect. Dis., 8, 129–146.

ALLEN, G.P. and BRYANS, J.T. (1986): Molecular epizootiology, pathogenesis, and prophylaxis of equine herpesvirus-1 infection. in Veterinary Microbiology and Immunology, 2, 78–144.

ATASEVEN, V.S.; DAGALP, S.B.; GüZELM., BASARAN, Z.; TAN M.T. and GERAGHTY, B. (2009):  Prevalence of equine herpesvirus-1 and equine herpesvirus-4 infections in equidae species in Turkey as determined by ELISA and multiplex nested PCR. Res. Vet. Sci., 86(2), 339-44.

BORCHERS, K. and SLATER, J. (1993): A nested PCR for the detection and differentiation of EHV-1 and EHV-4. J. Virol. Methods, 45, 331–336.

BRYANS, J.T. and ALLEN, G.P. (1988): Herpesviral diseases of the horse. In: Herpesvirus Diseases of Animals,Wittman G., ed. Kluwer, Boston, USA, 176–229.

BRYANS, J.T. and ALLEN, G.P. (1989): Herpesviral diseases of the horse. In: Herpesvirus Diseases of Cattle, Horses and Pigs, Ed: G. Wittmann, Kluwer, Boston, pp. 176-229.

CRABB, B.S. and, STUDDERT, M.J. (1995): Equine herpesviruses 4 (equine rhinopneumonitis virus) and 1 (equine abortion virus). Adv. Virus Res., 45, 153–190.

CRABB, B.S. and STUDDERT, M.J. (1993):  Epitopes of glycoprotein G of equine herpesviruses 4 and 1 located near the c-termini elicit type-specific antibody responses in the natural host. J. Virol., 67, 6332-6338.

CRABB, B.S. and STUDDERT, M.J. (1994): Equine herpesviruses 4 (equine rhinopneumonitis virus) and 1 (equine abortion virus). Adv. Virus Res., 45, 153-190.

CRABB, B.S.; MACPHERSON, C.M.; REUBEL, G.H.; BROWNING, G.F.; STUDDERT, M.J. and DRUMMER, H.E. (1997): Archives of Virology,  140(2), 245-258.

DOLL, E.R. and BRYANS, J.T. (1963): A planned infection program for immuniz­ing mares against viral rhinopneumonitis. Cornell. Vet., 53, 249-262.

DUTTA S.K. and TALBOT N.C. & MYRUP A.C (1983): Detection of equine herpesvirus-1 antigen and the specific antibody by enzyme-linked immunosorbent assay. Am. J. Vet. Res., 44, 1930 -1934.

EDINGTON, N.; WELCH, H.M. and GRIFFITHS, L. (1994): The prevalence of latent equid herpesviruses in the tissues of abattoir horses. Equine Vet. J., 26, 140-142.

GILKERSON, J.R.; JORM, L.R.; LOVE, D.N.; LAWRENCE, G.L. and WHALLEY, J.M. (1994): Epidemiologic investigation of equid herpesvirus 4 (EHV 4) excretion assessed by nasal swabs taken from Thoroughbred foals. Vet. Microbiol., 39, 275-283.

GILKERSON, J.R.; LOVE, D.N. and WHALLEY, J.M. (1997): Serological evidence of equine herpesvirus 1 (EHV-1) infection in Thoroughbred foals 30–120 days of age. Aust. Equine Vet., 15, 128–134.

GÜR, S. and YAPICI, O. (2008): Equine Herpesvirus type 1 and 4 in Individually Reared Horses in Central and Western Turkey. Acta Vet. Brno., 77, 609-613.

HARTLEY, C.A.; WILKS, C.R.; STUDDERT, M.J. and GILKERSON, J.R. (2005): Comparison of antibody detection assays for the diagnosis of equine herpesvirus 1 and 4 infections in horses. Am. J. Vet. Res., 66, 921-928.

MATUMOTO, M.; ISHIZAKI, R. and SHIMIZU, T. (1965): Serological survey of equine rhinopneumonitis virus infection among horses in various countries. Arch. Ges. Virusforsch., 50, 609–623.

O’CALLAGHAN, D.J.; GENTRY, G.A. and RANDALL, C.C. (1983): The equine herpesviruses. In: Roizman B, editor. The Herpesviruses. New York: Plenum Press., p. 215–318.

OIE, WWW.oie.int (2009): Information received on 15/12/2009 from Mr Bothle Michael Modisane, Chief Director Food and Veterinary Services, Department of Agriculture, Food Safety and Biosecurity: Department of Agriculture, PRETORIA, South Africa.

OIE, WWW.oie.int (2009): Information received on 20/05/2010 from Eng Sumaia Al Rais, Head of Animal and Plant Health, Animal and Plant Health Department, Ministry of Environment and Water, Dubai, United Arab Emirates.

PATEL, J.R. and HELDENS, J. (2005): Equine herpesviruses 1 (EHV-1) and 4 (EHV-4) – epidemiology, disease and immunoprophylaxis: a brief review. The Veterinary Journal, 170, 14–23.

REED, S.M. and TORIBIO, R.T. (2004): Equine herpesvirus 1 and 4. Veterinary Clinics of North America Equine Practice, 20, 631–642.

SLATER, J. (2007): Equine herpesviruses. In: Sellon, D., Long, M. (Eds.), Equine Infectious Diseases. Saunders Elsevier, St. Louis, USA, pp. 134–153.

STUDDERT, M.J. (1974): Comparative aspects of equine herpesviruses. Cornell. Vet., 64, 94-122.

THOMSON, G.R.; MUMFORD, J.A.; CAMPBELL, J.; GRIFFITHS, L. and CLAPHAM, P. (1976): Serological detection of equid herpesvirus 1 infections of the respiratory tract. Equine Vet. J., 8, 58–65.

VAN MAANEN, C. (2002): Equine herpesvirus 1 and 4 infections: an update.Veterinary Quarterly, 24, 58–78.

VAN MAANEN, C.; VREESWIJK, J.; MOONEN, P.; BRINKHOF, J.; DE BOER-LUIJTZE, E. and TERPSTRA, C. (2000): Differentiation and genomic and antigenic variation among fetal, respiratory and neurological isolates from EHV 1 and EHV 4 infections in the Netherlands. Vet. Q., 22, 88-93.

WELCH, H.M.; BRIDGES, C.G.; LYON, A.M.; GRIFFITHS, L. and EDINGTON, N. (1992): Latent equid herpesviruses 1and 4: detection and distinction using the polymerase chain reaction and co-cultivation from lymphoid tissues. J. Gen. Virol., 73, 261-268.

YASUNAGA, S.; MAEDA, K.; MATSUMARA, T.; KONDO, T. and KAI, K. (2000): Application of a type spesific enzymelinked immunosorbent assay for equine herpesvirus types 1 and 4 (EHV-1 and -4) to horse populations inoculated with inactivated EHV-1 vaccine. J. Vet. Med. Sci., 62, 687-691.

YASUNAGA, S.; MAEDA, K.; MATSUMARA, T.; KAI, K.; IWATA, H. and INOUE, T. (1998): Department of Veterinary Microbiology, Faculty of Agriculture, Yamaguchi University, Japan. Diagnosis and sero-epizootiology of equine herpesvirus type 1 and type 4 infections in Japan using a type-specific ELISA. J. Vet. Med. Sci., 60(10), 1133-1137.