DETECTION OF SPECIFIC ANTIBODIES AGAINST NEWCASTLE DISEASE IN THE EGG YOLK OF DIFFERENT TYPES OF CHICKS AND BIRDS

Document Type : Research article

Authors

Department of Microbiology, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq

Abstract

This study was aimed to detection of specific antibodies against Newcastle disease in the egg yolk of different types of chicks and birds, Five samples of eggs were obtained from each of local breed chicks, House breeding (Al-Arab) chicks, ducks, pigeon birds, in addition to hatching birds of broiler, Yolk was separated and diluted in distal water (1:1) and divided in to two parts: First part was used to evaluate the  specific antibodies against Newcastle disease in the egg yolk whereas second part was used as an attemption to elevate levels of protection against ND in small chicks at 28 days old by i.m injection of diluted yolk extract at a dose of 0.5 ml, Thirty chicks classified into six groups was used for this purpose, each group was injected by type of diluted yolk extract of different eggs and last group kept as control group without any treatment, Levels of specific antibodies against ND in egg yolk and serum of injected chicks with diluted yolk were tested by Heamagglutination inhibition test using 4 HA for live attenuated ND virus (lasota). Results were showed that highest titer of specific antibodies against ND was in the yolk of hatching eggs at a level of (32) whereas the lower titer was in the yolk of Duck eggs at a level of (2.6), Whereas the highest titer of injected chicks by yolk extract was in the first group which injected by yolk extract of hatching eggs at a level of (19.2) and lower titer was in group of chicks which injected by yolk extract of Duck egg at a level of (2.2).

Keywords

Full Text

DETECTION OF SPECIFIC ANTIBODIES AGAINST NEWCASTLE DISEASE IN THE EGG YOLK OF DIFFERENT TYPES OF CHICKS AND BIRDS

 

A.Z. ALZUBEADY; A. TAHA and A.A.K. SHEEHAN

Department of Microbiology, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq

Email: abd.imt74@yahoo.com

 

 

 

ABSTRACT

 

 

Received at: 20/1/2014

 

Accepted: 27/3/2014

 

This study was aimed to detection of specific antibodies against Newcastle disease in the egg yolk of different types of chicks and birds, Five samples of eggs were obtained from each of local breed chicks, House breeding (Al-Arab) chicks, ducks, pigeon birds, in addition to hatching birds of broiler, Yolk was separated and diluted in distal water (1:1) and divided in to two parts: First part was used to evaluate the  specific antibodies against Newcastle disease in the egg yolk whereas second part was used as an attemption to elevate levels of protection against ND in small chicks at 28 days old by i.m injection of diluted yolk extract at a dose of 0.5 ml, Thirty chicks classified into six groups was used for this purpose, each group was injected by type of diluted yolk extract of different eggs and last group kept as control group without any treatment, Levels of specific antibodies against ND in egg yolk and serum of injected chicks with diluted yolk were tested by Heamagglutination inhibition test using 4 HA for live attenuated ND virus (lasota). Results were showed that highest titer of specific antibodies against ND was in the yolk of hatching eggs at a level of (32) whereas the lower titer was in the yolk of Duck eggs at a level of (2.6), Whereas the highest titer of injected chicks by yolk extract was in the first group which injected by yolk extract of hatching eggs at a level of (19.2) and lower titer was in group of chicks which injected by yolk extract of Duck egg at a level of (2.2).

 

 

Key words: Specific A.b., Newcastle Disease, Egg yolk, Chicks.

 

 

التحري عن الأجسام المضادة لمرض النيوکاسل في صفار البيض لأنواع مختلفة من الدجاج والطيور

 

أنوار زکي الزبيدي , أحمد طه , عبد الله عبدالعزيز خليل شيحان

Email: abd.imt74@yahoo.com

 

استهدفت هذه الدراسة التحري عن الأجسام المضادة لمرض النيوکاسل في صفار البيض لأنواع مختلفة من الدجاج والطيور , تم أخذ خمسة عينات مختلفة من بيض کل من الدجاج المحلي وسلالة دجاج التربية المنزلية (العرب) والبط وطيور الحمام إضافة إلى بيض التفقيس لفروج اللحم , تم فصل الصفار وتخفيفه بالماء المقطر بنسبة 1:1 وقسم إلى قسمين: استخدم القسم الأول لقياس مستوى الأجسام المضادة لمرض النيوکاسل في الصفار في حين استخدم القسم الثاني في محاولة لرفع مستوى الحماية عند الأفراخ الصغيرة بعمر 28 يوما ضد مرض النيوکاسل بحقنه عن طريق العضل بجرعة 0.5 مل حيث استخدم لهذا الغرض ثلاثون فرخا قسمت إلى ستة مجاميع متساوية حقنت کل مجموعة بنوع معين من مستخلص الصفار لأحد أنواع البيض المستخدم وترکت ألمجموعة الأخيرة بدون معاملة کمجموعة سيطرة , تم قياس مستوى الأجسام المضادة لمرض النيوکاسل في صفار البيض ومصل الأفراخ المحقونة بمستخلص الصفار باختبار تثبيط التلازن الدموي وباعتماد   4HAلفيروس النيوکاسل الحي المضعف (لاسوتا). وقد أظهرت النتائج إن أعلى معيار للأجسام المضادة أعطاها صفار بيض التفقيس بمعيار (32) واقل معيار کان لصفار بيض البط بمعيار (2.6) أما أعلى معيار لمصل الأفراخ المحقونة بمستخلص الصفار أعطتها المجموعة الأولى المحقونة بمستخلص صفار بيض التفقيس بمعيار (19.2) واقل معيار کان عند مجموعة الأفراخ المحقونة بمستخلص صفار بيض البط بمعيار (2.2).

 

INTRODUCTION

المقدمـــة

 

يعد مرض النيوکاسل في الدواجن من الأمراض الفايروسية الوبائية الخطيرة على صناعة الدواجن في العالم وذلک من خلال ما يسببه من خسائر اقتصادية کبيرة في أفراخ اللحم وأمهات بيض التفقيس وبيض المائدة (Rivets et al., 1985). يتسبب المرض بواسطة فايروس ينتمي إلى عائلة فايروسات Paramyxoviridae وتحت عائلة Paramyxovirinae جنس avulavirus النمط  PMV1(Llariacapua and Alexander , 2009; Quinn et al., 2002). هذه الفايروسات لها القابلية على إصابة أنواع أخرى من الطيور البرية والمستأنسة ويتميز المرض بعلامات هضمية وتنفسية وعصبية متباينة الشدة کما يحدث المرض إصابات في مناطق مختلفة من العالم ويمکن أن ينتشر أيضا بواسطة الطيور البرية والحمام (Alexander, 1990). وتلعب الدواجن الحاملة للفايروس carrier والطيور المستوردة والمهاجرة والطيور البرية دورا کبيرا في نشر المرض (Quinn et al., 2002 ; الزبيدي , 1995Alexander, 1988; ). إن مستوى الأجسام المضادة الموجودة في صفار البيض له علاقة مباشرة مع مستوى الأجسام المضادة المصلية للدجاج والطير ولذلک يمکن استخدام صفار البيض لقياس مستوى الأجسام المضادة بدلا من سحب الدم وذلک لسهولتها حيث إن سحب الدم يعرض الطائر إلى الکلم والإجهاد ويحتاج إلى جهد ووقت أطول وتکون مکلفة ولذلک يمکن استخدام صفار البيض لهذا الغرض حيث يتم فصل الصفار عن البياض وتخفيفه بطرق متعددة مثل استخدام المذيبات العضوية کالکلوروفورم أو تخفيف الصفار باستخدام ملح دارئ الفوسفيت   PBSأو الماء المقطر أو التجميد والتذويب المتکرر أو استخدام الملح الفسيولوجي Normal saline (الزبيدي , 1995 Rudiger and Straughan, 1996; Alexander, 2003;). ولذلک استهدفت الدراسة التحري عن الأجسام المضادة لمرض النيوکاسل في صفار البيض من خلال اختبار تثبيط التلازن الدموي ومقارنة مستوى تلک الأجسام المضادة في صفار البيض لأنواع مختلفة من الدواجن والطيور وبالتالي إمکانية استخدامها في رفع مستوى الحماية للأفراخ ضد مرض النيوکاسل من خلال حقن الأفراخ بمستخلص الصفار وقياس مستوى الأجسام المضادة في المصل.

 

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق العمل

 

عينات البيض

تم جمع البيض من مصادر مختلفة بواقع خمسة عينات لکل مصدر حيث تم الحصول على نماذج بيض المفقسة من مفقس الامين التجاري للإنتاج الزراعي والحيواني المحدودة أما بقية الأنواع فتم الحصول عليها بشکل عشوائي من المربين هواة تربية الدجاج المنزلي ومن الأسواق المحلية.

 

الأفراخ

تم استخدام 30 فرخ فروج لحم بعمر 28 يوما تم الحصول عليها من بيت الحيوانات التابع لکلية الطب البيطري/ جامعة الموصل استخدمت لأغراض حقن مستخلص صفار البيض وبواقع 0.5 مل في العضل/ طائر وقسمت إلى خمسة مجاميع:

 

المجموعة الأولى / خمسة أفراخ حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض التفقيس

المجموعة الثانية / خمسة أفراخ حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض الدجاج المحلي

المجموعة الثالثة / خمسة أفراخ حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض التربية المنزلية (العرب)

المجموعة الرابعة / خمسة أفراخ حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض الحمام

المجموعة الخامسة / خمسة أفراخ حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض البط

المجموعة السادسة / خمسة أفراخ ترکت بدون معاملة واستخدمت کمجموعة سيطرة

 

عينات المصل

جمع الدم من مجاميع الأفراخ بعد خمسة أيام من عملية حقن مستخلص صفار البيض ومن القلب مباشرة ومن دون استخدام موانع التخثر وتم فصل المصل وحفظ تحت التجميد لحين استعماله في الاختبار المصلي.

 

عترة الفيروس

استخدمت عترة اللقاح الحي المضعف (لاسوتا)  EID 50106شرکة لوهمان في اختبار التلازن الدموي.

 

الملح الفسيولوجي

استخدم الملح الفسيولوجي الجاهز المتوفر في الأسواق في کل من اختبار التلازن الدموي لتخفيف عترة اللقاح (لاسوتا) وفي عملية غسل خلايا الدم الحمراء وفي عملية فصل صفار البيض.

 

خلايا الدم الحمراء المغسولة

استخدم دم الدجاج لهذا الغرض وتم غسلها باستعمال محلول الملح الفسيولوجي وبواسطة جهاز الطرد المرکزي بسرعة (2000) rpm لمدة خمسة دقائق أهمل الطافي وخفف الراسب بنسبة (1%) للاستعمال في اختبار التلازن الدموي.

 

فصل صفار البيض

فصل صفار البيض عن البياض باستخدام أدوات نظيفة ومعقمة وغسل کيس الصفار جيدا لإزالة المتبقي العالق من البياض وثقب الکيس وترک الصفار لينساب في أنبوبة خاصة معقمة وخفف بعد ذلک بواسطة محلول الملح الفسيولوجي بنسبة (1:1) مزج جيدا وفصل بعد ذلک بجهاز الطرد المرکزي بسرعة (1500) rpm أهمل الراسب وحفظ الراشح تحت التجميد لحين الاستخدام.

 

الفحوصات المستخدمة

اختبار التلازن الدموي Haemagglutination test  (HA test)

استخدمت أطباق المعايرة الدقيقةMicro titer palate  وتم معايرة الفيروس اللقاحي (لاسوتا) بطريقة التخفيف الثنائي واستخدم وحدة التلازن (4HA) لإجراء اختبار تثبيط التلازن الدموي لعينات الصفار والمصل.

 

اختبار تثبيط التلازن الدموي Haemagglutination Inhibition test (HI test)

استخدم اختبار تثبيط التلازن الدموي باعتماد (4HA) لعترة الفيروس اللقاحي الحي المضعف (لاسوتا) حيث تم وضع محلول الملح لفسيولوجي في أطباق المعايرة الدقيقة Micro titer palate وبواقع 0.05 مل لجميع الحفر وقد تم وضع 0.05 مل من صفار البيض في الحفرة الأولى فقط واجري التخفيف الثنائي لها ثم أضيف الفايروس اللقاحي بمقدار 0.05 مل لجميع الحفر وترک الطبق لمدة 15- 20 دقيقة لتسهيل حصول التفاعل بين الضد والمستضد بعد ذلک أضيف معلق خلايا الدم الحمراء المغسولة بواقع 0.05 مل لجميع الحفر وترک الطبق في درجة حرارة الغرفة لمدة 30- 45 دقيقة قبل قراءة النتيجة وتم إجراء الاختبار نفسه على جميع عينات الصفار والمصل.

RESULTS

النتائــج

 

أظهرت نتائج اختبار تثبيط التلازن الدموي لعينات صفار البيض من مصادر مختلفة وجود أعلى معيار من الأجسام المضادة لفيروس مرض النيوکاسل في صفار بيض التفقيس وبمعيار (32) واقل معيار کان في صفار بيض البط وبمعيار (2.6) وکما في الجدول رقم (1).

 

کما أظهرت نتائج اختبار تثبيط التلازن الدموي لعينات مصل الأفراخ أن أعلى معيار له کان في مصل الأفراخ التي حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض التفقيس وکان معياره (19.2) واقل معيار له کان في مصل الأفراخ التي حقنت بصفار البيض المستخلص من بيض البط والذي کان معياره (2.2) وکما هو موضح في الجدول رقم (2).

 

جدول رقم 1: معدل معيار الأجسام المضادة لفيروس النيوکاسل في صفار البيض في اختبار تثبيط التلازن الدموي.

 

نوع البيض

 

معدل معيار تثبيط التلازن الدموي

بيض التفقيس

32

بيض الدجاج المحلي

16

بيض التربية المنزلية ( العرب)

4

بيض الحمام

4.1

بيض البط

2.6

 

جدول رقم 1: معدل معيار الأجسام المضادة لفيروس النيوکاسل في مصل الأفراخ التي حقنت بأنواع مختلفة من مستخلص صفار البيض في اختبار تثبيط التلازن الدموي.

 

المجاميع

متوسط معيار تثبيط التلازن الدموي

المجموعة الأولى

19.2

المجموعة الثانية

8.2

المجموعة الثالثة

3.6

المجموعة الرابعة

4.1

المجموعة الخامسة

2.2

المجموعة السادسة

1.4

 

DISCUSSION

المناقشة

 

إن الأجسام المضادة المتخصصة للمستضد والسائدة في دم الدواجن هي من نوع الـ IgY والذي يشبه الـ IgG من ناحية الوظيفة ولکن يختلف عنها بعض الشيء من ناحية الترکيب ويمکن للـ IgY أن ينتقل من الدورة الدموية للدجاج البياض إلى صفار البيض Egg Yolk والذي اکتسب تسميته منها وان نسبته في الصفار يتناسب بشکل طردي مع نسبته في الدم وبالتالي يمکن استخدام الصفار کدليل على تواجد الـ IgY في الدم. إن تلقيح الدجاج البياض بالفيروس أللقاحي والتي هي بمثابة مستضد يکون قادرا على تحفيز الجهاز المناعي على إنتاج الأجسام المضادة المتخصصة من نوع IgY الذي يترکز في الدم وينتقل فيما بعد إلى الصفار. وقد بينت النتائج في هذه الدراسة إلى أن البيض المعد للتفقيس أعطى أعلى نسبة من الـ IgY مقارنة مع الأنواع الأخرى من عينات البيض والسبب في ذلک يعود إلى إن أمهات بيض التفقيس Parent stocks قد لقحت بشکل مکثف ضد المرض قبل مرحلة وضع البيض , حيث إن التلقيح المبرمج للام يؤدي إلى زيادة مستوى الـ IgY في الدم ومن ثم انتقاله إلى صفار البيض الذي استخدم کدليل لتواجده في الدم وان قلة نسبة الـ IgY في صفار البيض لباقي الأنواع يعود إلى قلة برامج التلقيح وعدم إتباعها نظام مبرمج ومتواصل ضد المرض (الزبيدي , 1995 ; Tizard , 2004 ; رمضان , 2010; شيحان , 2010). يحدث انتقال الـ IgY من الدورة الدموية للأمهات إلى البيضة في طور النضوج داخل جريبات البيض ovarian follicle عن طريق مستقبلات خاصــة موجـودة على غشــاء صفــار البيــض المسمـــى  IgY receptors on ovarian follicles والــذي يسمـح بنقـل جميـع أنـواع Subpopulation of IgY الموجـودة فـي دم الأمـهـات ((Rose and Orlans , 1981. والخطوة الثانية انتقال الـIgY من صفار البيض egg yolk إلى ألصوص عن طريق دوران الدم في المرحلة الجنينية Embryonic circulation , ويمکن استخدام الـ IgY المستخلص من الصفار في إعطاء الحماية والسيطرة ضد الاخماج المختلفة عن طريق إعطاءه کمناعة جاهزة منفعلة  passive immunity وهي من التوجهات الحديثة في استخدام الـ IgY کتطبيق علاجي للسيطرة على العديد من الاخماج حيث يتم حقن الدجاج بمستضد معين لتقوم هذه الطيور بمقام المصنع البايلوجي لتصنيع الـ IgY المطلوب لاستخدامه لاحقا , کما إن له دور بإعطائه عن طريق العضل ذلک إن إعطاءه عن طريق الفم قد يعرضه إلى التحلل والتفکک عن طريق الأنزيمات الموجودة في المجرى المعدي المعوي والذي يقلل من تأثيره ونسبة إعطاءه (; Rudiger and Straughan, 1996; Alexander, 2003شيحان ,  ; 20102012(   Alzubeady and Alattar,  وتکمن خلاصة هذا البحث بإعطاء فکرة مستقبلية عن أهمية استخدام صفار البيض کتطبيق علاجي ووقائي ضد کثير من الاخماج ولکن بأسلوب علمي مدروس لإنجاح عملية تطبيقه.

 

REFERENCES

المراجــع

 

Alexander, D.J. (1988): Newcastle disease. Kulwer Acad. Pubsbosten.

Alexander, D.J. (1990): Avian Paramyxo viridae. Recent development Vet. Microbiol. 23:3-114.

Alexander, D.J. (2003):Newcastle disease. In: Diseases of poultry CY.M.SA. F, edj. 11th Ed Iowa state university press, Ames, 64-87.

Alzubeady, A.Z. and Alattar, M.Y. (2012): Effect of hyper immunized egg yolk on maternal immunity of Newcastle disease vaccine in broiler chicks. Accepted research in 6th conference of Vet. Med.College of Mosul in No. 393. 2012.

IANR, Tizard (2004): Veterinary Immunology An Introduction. seventh ED. Elsevier (USA).

Llariacapua and D.J. Alexander (2009): Avian Influenza and Newcastle disease. Springer. Verlag, Italia: 19-24.

Quinn, P.J.; Markwy, B.K.; Carter, M.E.; Donnelly, W.J.C. and Leonard, F.C. (2002): Veterinary Microbiology and Microbiol; Black well publishing company, UK.

Rivets, B.; Weisman, Y.; Herband, M.R. and Herzberg, M. (1985): Evaluation of a novel rapid kit for vistual detection of Newcastle disease virus antibodies. Avi. Dis. 29(4): 929-942.

Rose, M.E. and Orlans, E. (1981): Immunoglobulins in the egg embryo, and young chick. Dev. Comp. Immunol., 5, 15-20.

Rudiger, S. and Straughan, D. (1996): The production of Avian (Egg Yolk) Antibodies: IgY, ATLA 24,         925-934.

 

الزبيدي , أنوار زکي (1995): الکشف عن الأضداد الواردة من الأمهات والمضادة لفايروس مرض نيوکاسل الدواجن في البيض والصيصان وعلاقتها بمستوى التحصين والتحدي , رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل.

رمضان , عباس شيناوة  :(2010) دراسة الاستجابة المناعية والتداخل للقاحي أنفلونزا الطيور النمط المصلي H9N2 ومرض النيوکاسل في فروج اللحم . رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل .

شيحان , عبدالله عبدالعزيز  :(2010) تداخل المناعة الأمية مع الاستجابة المناعية للأفراخ الملقحة بلقاح کمبورو . رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل .

 

References

 
REFERENCES
المراجــع
 
Alexander, D.J. (1988): Newcastle disease. Kulwer Acad. Pubsbosten.
Alexander, D.J. (1990): Avian Paramyxo viridae. Recent development Vet. Microbiol. 23:3-114.
Alexander, D.J. (2003):Newcastle disease. In: Diseases of poultry CY.M.SA. F, edj. 11th Ed Iowa state university press, Ames, 64-87.
Alzubeady, A.Z. and Alattar, M.Y. (2012): Effect of hyper immunized egg yolk on maternal immunity of Newcastle disease vaccine in broiler chicks. Accepted research in 6th conference of Vet. Med.College of Mosul in No. 393. 2012.
IANR, Tizard (2004): Veterinary Immunology An Introduction. seventh ED. Elsevier (USA).
Llariacapua and D.J. Alexander (2009): Avian Influenza and Newcastle disease. Springer. Verlag, Italia: 19-24.
Quinn, P.J.; Markwy, B.K.; Carter, M.E.; Donnelly, W.J.C. and Leonard, F.C. (2002): Veterinary Microbiology and Microbiol; Black well publishing company, UK.
Rivets, B.; Weisman, Y.; Herband, M.R. and Herzberg, M. (1985): Evaluation of a novel rapid kit for vistual detection of Newcastle disease virus antibodies. Avi. Dis. 29(4): 929-942.
Rose, M.E. and Orlans, E. (1981): Immunoglobulins in the egg embryo, and young chick. Dev. Comp. Immunol., 5, 15-20.
Rudiger, S. and Straughan, D. (1996): The production of Avian (Egg Yolk) Antibodies: IgY, ATLA 24,         925-934.
 
الزبيدي , أنوار زکي (1995): الکشف عن الأضداد الواردة من الأمهات والمضادة لفايروس مرض نيوکاسل الدواجن في البيض والصيصان وعلاقتها بمستوى التحصين والتحدي , رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل.
رمضان , عباس شيناوة  :(2010) دراسة الاستجابة المناعية والتداخل للقاحي أنفلونزا الطيور النمط المصلي H9N2 ومرض النيوکاسل في فروج اللحم . رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل .
شيحان , عبدالله عبدالعزيز  :(2010) تداخل المناعة الأمية مع الاستجابة المناعية للأفراخ الملقحة بلقاح کمبورو . رسالة ماجستير , کلية الطب البيطري , جامعة الموصل .

Files

Share

How to cite

Statistics