DETECTION OF BLOOD PROTOZOA IN PET DOGS IN NINEVEH PROVINCE

Assiut University web-site: www.aun.edu.eg

DETECTION OF BLOOD PROTOZOA IN PET DOGS IN NINEVEH PROVINCE

WASAN AMJAD ALOBAIDII; RAFAL LUQMAN ALLHAIBI and

MARYAM AHMED ALKHERO

College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Iraq

Received: 15 April 2019;     Accepted: 27 Jun 2019

الکشف عن الاوالي الدموية في الکلاب المنزلية في محافظة نينوى

وسن امجد العبيدي ،  رفل لقمان اللهيبي ، مريم احمد الخيرو

کلية الطب البيطري - جامعة الموصل – العراق

ABSTRACT

الخلاصة

تم خلال هذه الدراسة جمع 54 عينة دم من الوريد الرأسي للکلاب التي تربى في المنازل ومن کلا الجنسين وباعمار مختلفة  ومن سلالات متباينة , تم تحضير المسحات الدموية ومن ثم صبغت بصبغة کيمزا وفحصت تحت مجهر الضوئي للتقصي عن الاوالي الدموية , بينت نتائج الفحص السريري للکلاب ان العديد منها يعاني من اعراض عصبية متباينة , بالضعف العام , البيلة الدموية , تضخم العقد اللمفية في حين کان البعض الاخر منها سليم ظاهريا , ترافقت مع هذه الاعراض الکشف عن عدد من الاوالي الدموية شملت Babesia gibsoni, B.canis, Trypanosoma evansi, Hepatozoon canis حيث کان اعلى نسبة اصابة بطفيلي Babesia 31.4% في حين کانت اقل نسبة اصابة لطفيلي Trypanosoma evansi 11.2% , کما تم تسجيل طفيلي Hepatozoon canisلاول مرة وبنسبة اصابة بلغت 20.3% , کما لوحظت بعض الحالات فيها خمج مزدوج لکل من طفيلي Trypansoma evansi  وطفيلي Hepatozoon canis اظهرت النتائج ان اعلى نسبة اصابة بالاوالي الدموية کانت في الاعمار

Corresponding author: Dr. WASAN AMJAD ALOBAIDII

E-mail address: wasenamjad@yahoo.com

Present address: College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Iraq

کبيرة العمر مقارنة بالصغيرة العمر وبفروق معنوية واضحة, في حين سجلت الذکور اعلى نسبة اصابة مقارنة بالاناث وبوجود فروقاً معنوية , کذلک بينت النتائج ان اعلى نسبة اصابة کانت في السلالات کبيرة الحجم مقارنة بالصغيرة منها. نستنتج من هذه الدراسة وجود نسبة اصابة بالاوالي الدموية في الکلاب المنزلية لذلک ننصح مربي الکلاب باستخدام العقاقير المخصصة للاوالي الدموية مع مکافحة الطفيليات الخارجية وفحص الحيوانات دوريا في العيادات البيطرية للکشف عن الاصابة مبکرا.

INTRODUCTION

المقدمة

تعد الکلاب احد الحيوانات الذکية والمصاحبة في تربيتها مع الانسان واستخدمت على مر العصور في حماية الانسان وحيواناته المستأنسة الاخرى , وجرى الاهتمام بالامراض التي تصيبها نظرا لکونها مضيفا خازنا مهما للعديد من الامراض المشترکة بينها وبين الانسان , حيث اشار العديد من الباحثين لما له من دورا فاعلا في نقل الاصابة , اذ سجل اکثر من 36 مرضا انتقاليا يمکن للکلاب ان تصبح مضيفا خازنا لها على مستوى العالم (Samradhni, 2002).

تعد الاوالي الدموية من احد اهم الامراض الطفيلية التي تصيب الکلاب منها (Babesia spp, Hepatozoon spp,Anaplasma spp, Trypanosoma spp, Leishmania spp, and) , تنتقل هذه الطفيليات بوساطة المفصليات مثل القراد , القمل , البعوض , الذباب وذباب الرمل (Lan et al., 2017, Michal et al., 2010)

تسبب هذه الاوالي الدموية اعراضا سريرية عديدة منها فقر الدم , الهزال , اعراضا عصبية , اسهال , تقيؤ , تضخم العقد اللمفية , اليرقان وفي بعض الاحيان تسبب الموت (Mahmud et al., 2014).

يتم تشخيص هذه الاوالي عادة عن طريق المسحات الدموية بانواعها او عن طريق التقصي عن الاضداد النوعية للطفيلي وفي بعض الاحيان يمکن استخدام تقنيات ذات حساسية عالية للکشف عن الدنا للطفيلي مثل تفاعل سلسلة البلمرة et al., 2008) Gadahi). جرى في العراق تشخيص عدد من هذه الاوالي الدموية في الکلاب بينما البقية لم يتم تشخيصها الى حد الان اذ تعتبر احد الامراض الطارئة فيما تم الکشف عنها (Saleem, 2007) .

لوحظ خلال العامين المنصرمين الاکثار من تربية الکلاب في المنازل في مدينة الموصل ومع هذه الزيادة في تربية الکلاب کانت متقارنة معها زيادة في الکثافة العددية لها , ازدادت وظهرت معها العديد من الامراض الطفيلية وبالرغم من ذلک تفتقر مدينة الموصل للدراسات العلمية الاکاديمية فيما يخص الاوالي الدموية التي تصيب الکلاب التي يتم تربيتها في المنازل في مدينة الموصل. لذلک تم اجراء هذه الدراسة التي هدفت الى الکشف عن الاوالي الدموية في الکلاب والتي تربى حصرا في المنازل وايجاد العلاقة ما بين نسبة الاصابة بالاوالي الدموية والعمر , الجنس , الاعراض السريرية , والسلالة.

MATERIALS AND METHODS

المواد وطرائق العمل

حيوانات الدراسة

تضمنت هذه الدراسة 54 کلبا متباينة من ناحية الجنس , العمر (6 أشهر-2 سنة) والسلالة حيث شملت هذه الدراسة الحيوانات التي يتم تربيتها في المنازل , تم فحص هذه الحيوانات وتسجيل العلامات السريرية الظاهرة عليها وتسجيل تلک المعلومات في بطاقة الفحص السريري , عند مراجعتها للمستشفى التعليمي البيطري في کلية الطب البيطري - جامعة الموصل فضلا عن بعض العيادات البيطرية الخاصة .

جمع العينات

تم جمع الدم بواقع 5 مل من الوريد الراسي Cephalic vein وضع الدم في انابيب تحوي على مانع تخثر EDTA وذلک لغرض تحضير المسحات الدموية.

تحضير المسحات الدموية الخفيفة وصبغها

تم اخذ قطرة واحدة من الدم ووضعت على حافة شريحة زجاجية تم نشرت لباقي الشريحة ومن ثم ترکت لحين جفافها , ثبتت الشريحة بعد ذلک باستخدام الکحول المثيلي المطلق لمدة 5 دقائق, فضلا عن عمل مسحات دموية رطبة للکشف عن حرکة الطفيلي ((Coles,1986.

تحضير الخلايا اللمفية

تم سحب 70 مايکروليتر تقريبا من الدم باستخدام الانابيب الشعرية الدقيقة والحاوية على مانع تخثر ومن ثم تغلق احدى نهايتها ومن ثم توضع في جهاز الطرد المرکزي الشعري , بعد ذلک يتم اخذ طبقة Buffy coat بعد کسر الانبوب الشعري ويوضع فوق شريحة زجاجية وتجفف ومن ثم يتم صبغها باستخدام صبغة کيمزا (Coles,1986 (.

صبغ المسحات الدموية باستخدام صبغة کيمزا Giemsa stain

تم غمر شريحة الدم المثبتة في حاوية تحوي على صبغة کيمزا لمدة 20 دقيقة , اخرجت الشريحة بعد ذلک وتم غسلها باستخدام دارئة الفوسفات المتعادلة , جففت بعد ذلک وتم فحصها باستخدام المجهر الضوئي تحت قوى تکبير مختلفة وذلک للکشف عن الاوالي الدموية وتشخيصهـا حسب صفاتــها الشکليــة وقيــاس ابعادهـــا باستخــدام Ocular micrometer. (Hoare,1972, Coles,1986, Durate et al., 2016)

التحليل الاحصائي

استخدم مربع کاي ضمن البرنامج الاحصائي الحاسوبي  Spss program (V19)

RESULTS

النتائج

نتائج الفحص السريري

بينت نتائج الفحص السريري للحيوانات المشمولة بالدراسة وجود بعض الحيوانات تعاني من الضعف العام , الخمول , اعراض عصبية, فقدان الشهية , شحوب الاغشية المخاطية , تضخم العقد اللمفية , الاسهال , البول المدمم , اصابتها بالقراد فيما کان البعض منها سليم ظاهرياً , فيما بينت نتائج الفحص المجهري للمسحات الدموية التي تم صبغها باستخدام صبغة کيمزا وجود اعلى نسبة اصابة بطفيلي  Babesia (31.4%) فيما سجلت اقل نسبة اصابة بطفيلي Trypanosoma evansi اذ بلغت 11.2% ,في حين تراوحت نسبة الاصابة بطفيلي Hepatozoon canis  بينهما اذ بلغت 20.3%, واظهر فحص المسحات الدموية تواجد طفيلي Babesia canis and B.gibsoni داخل کريات الدم الحمر وباشکال مختلفة (الشکل-1-) (الکمثري المزدوج , الاميبي , الحلقي والغير منتظم). اذ تمييز کل منهما عن طريق قياس کل طفيلي اذ بلغ معدل قياس (B.gibsoni 1.16µm) و (B.canis 4.9µm) جدول-1-

کما لوحظ طفيلي Trypanosoma evansi بشکله النموذجي الاسطواني, اذ تم تمييزه حسب صفاته الشکلية والقياسية اذ کان معدل قياسه (23µm) (الشکل-2-)  الجدول -2-.

کما تبين من النتائج ان طفيلي Hepatozoon canis کان بشکل شبه دائري الى بيوضي داخل العدلات اذا کان قياسه ضمن المدى القياسي والشکلي للطفيلي (الشکلين 4,3).

کما سجلت بعض الحالات التي ظهر فيها اصابة مزدوجة بکل من طفيلي Trypanosoma evansi وطفيلي Hepatozoon canis  (الشکل 5) کما اظهرت النتائج وجود طفيلي Trypanosoma.evansi في المسحات المحضرة من طبقة الخلايا اللمفية  (الشکل-6-)

جدول 1: علاقة الاعراض السريرية بنوع الاوالي الدموية في الکلاب

جدول 2: قياسات طفيلي Trypanosoma evansi في الکلاب

PK=distance from posterior end to kinetoplast

KN=distance from kinetoplast to middle of nucleus

PN=distance from posterior end to middle of nucleus

NA=distance from nucleus to anterior extremity

F=Free flagellum

L=total length including free flagellum

وعند مقارنة نسبة الاصابة بالفئات العمرية  بينت النتائج ان اعلى نسب اصابة کانت في الحيوانات کبيرة العمر لکافة الاوالي الدموية التي شخصت في الدراسة وانخفضت نسبة الاصابة بنقصان عمر الحيوانات حيث بلغت اقل نسبة اصابة في الحيوانات التي بلغت اعمارها 6 اشهر – 1 سنة وبفروق معنوية واضحة بين الفئات العمرية الکبيرة والصغيرة. وکما هو مبين في الجدول-3 –

جدول 3: يبين علاقة نسبة الاصابة بالاوالي الدموية بالفئات العمرية للکلاب

* الاختلاف بالاحرف يعني ان القيم تختلف معنويا تحت مستوى احتمال p<0.05

بينت نتائج علاقة نسبة الاصابة بالاوالي الطفيلية بجنس الحيوانات ان اعلى نسب اصابة سجلت بالذکور مقارنة بالاناث ولجميع المجاميع وبفروق معنوية احصائياً , الجدول-4 –

جدول 4: علاقة نسبة الاصابة بالاوالي الدموية بجنس الکلاب

* الاختلاف بالاحرف يعني ان القيم تختلف معنويا تحت مستوى احتمال p<0.05

اما بالنسبة لعلاقة نسبة الاصابة بسلالة الکلاب التي خضعت للدراسة فتبين ان نسبة الاصابة بمجمل انواع الاوالي الدموية کانت مرتفعة في سلالة الکلاب کبيرة الحجم , في حين ان السلالات صغيرة الحجم کانت نسبة الاصابة الکلية بالاوالي الدموية منخفضة ,جدول - 5-

جدول 5: علاقة نسبة الاصابة بالاوالي الدموية بسلالة الکلاب

المناقشة

للاوالي الدموية  تأثيرات مباشرة وغير مباشرة على صحة الحيوانات وان علاماتها المرضية متباينة ومتعددة, ومن هذه العلامات فقدان الشهية , الهزال , فقر الدم , البيلة الدموية , شحوب الاغشية المخاطية وعلامات عصبية فضلا عن

الحيوانات المصابة بالطفيلي والتي لا تظهر الاعراض المرضية (حاملة للمرض), اذ بينت نتائج دراستنا ارتفاعا بنسبة الاصابة بطفيلي Babesia مقارنة ببقية الاوالي الدموية التي تم الکشف عنها في دراستنا , مع تسجيل النوعين  (B.canis, B.gibsoni) وهذا اتفق مع ما اورده الباحث (Arsalan, 2005) حيث سجل هذين النوعين في الکلاب في مدينة الموصل , اقترنت الاصابة بهذا الطفيلي مع الاعراض السريرية المتمثلة بالاصابة بالقراد , البول المدمم , الخمول وغيرها اذ کانت هذه الاعراض مرتفعة بهذا النوع من الاوالي مقارنة بالبقية , اتفقت هذه النتائج مع ما ذکره (Gadahi et al., 2008) حيث ان الارتفاع في نسب الاصابة في دراسته کان مرتفعا في مواسم معينة مقارنة بالطفيليات الدموية الاخرى وقد اعزي سبب ذلک لدور انتشار الناقل البايولوجي في مواسم معينة دون المواسم الاخرى من السنة , واختلفت

النتائج مع ما ذکره (Mahmud et al., 2014) اذ سجل اقل نسبة اصابة بطفيلي Babesia مقارنة بالاوالي الدموية الاخرى وقد اعزي السبب الى الاختلاف في الانتشار الجغرافي بين بلدان العالم.

تبين من خلال فحص المسحات الدموية , تسجيل الاصابة بطفيلي Trypanosoma evansiفي الکلاب وبنسبة اصابة 11.2% حيث تم تشخيصه حسب الصفات الشکلية والقياسية , ولغرض اجراء مقارنة بين نتائج بحثنا مع دراسات محلية لم نجد سوى دراسة واحدة قد سجلت هذا النوع في الکلاب السائبة في العاصمة بغداد (Faraj et al., 2015) اذ بلغت نسبة الاصابة 43.75% , ويتبين من ذلک ان نسبة الاصابة المسجلة في دراستنا منخفضة مقارنة بالدراسة انفة الذکر , ان سبب هذا التباين يعود لاسباب عديدة منها ان الکلاب التي يتم بتربيتها في المنازل يجري الاعتناء بها من ناحية الرعاية الصحية مثل معالجتها الدورية للطفيليات الخارجية , فضلا عن متابعتها الدورية من قبل ذوي الاختصاص مما يقلل من فرصة اصابتها بالاوالي الدموية (Adazek et al., 2016., Youn, and Xuenan, 2014) وعلى العکس من ذلک فان الکلاب السائبة تفتقر للعناية الصحية فضلا عن تغذيتها على مواقع رمي النفايات وعلى مخلفات المجازر والتي تکون غنية بالنواقل البايولوجية مما يزيد من نسب اصابتها.

اما طفيلي Hepatozoon canis فسجلت دراستنا الحالية نسبة اصابة کلية بلغت 20.3%  حيث اجري تشخيصه ووصفه وفق ما تم ذکره من قبل (Soulsby, 1982, Baneth and Shkap, 2003) واثناء البحث عن دراسات لغرض مقارنتها في العراق لم يتبين وجود اي دراسة مسبقة حول هذا الطفيلي , الا ان هذا الطفيلي جرى تسجيله في الدول المجاورة للعراق مثل ترکيا (Aydin et al., 2015) ايران (Barati and Razmi, 2018) فضلا عن العديد من الدول التي يجري استيراد الکلاب منها مثل اوکرانيا (Korzah and Zadorozhnyaya, 2013) والتي غالبا ما تکون ذات سلالات عالمية لذا فمن المحتمل ان تکون بعض هذه الکلاب حاملة للاصابة وتم ادخال الطفيلي من خلالها الى القطر لذا يعد من الامراض الطارئة الى العراق.

بينت نتائـج علاقـة الفئــات العمريـة بنسبــة الاصابــة وجــود نسبــة اصابــة مرتفعــة بالاوالي الدمويــة في الفئــات العمريـة الاکـبر سنـاً اذ تناقصـت نسبـة الاصابـة بصغر العمر وبفروق معنوية واضحــة, وهذا يتفق مــع مــا ذکــره (Gahdai et al., 2008 Mahmud et al., 2014) . وقد فسر هذه النتيجة لاسباب عديدة منها ان الحالة المناعية للحيوانات صغيرة العمر تکون قادرة على مقاومة الاصابة بالطفيليات الدموية مقارنة بالکبيرة منها فضلا عن ان الحيوانات کبيرة العمر تکون اکثر عرضة للاصابة نتيجة الفرق العمري بين الحيوانات مما يزيد من فرصة تعرضها للاصابة. في حين لم تتفق نتائجنا مع الدراسة التي قام بها (Samradhni, 2002) حيث بينت دراسته ان الکلاب الاصغر من سنة تکون اکثر عرضة وحساسية للاصابة مقارنة بالاکبر سنا وقد اعزي ذلک لاسباب عديدة منها عدم اکتمال تکوين الجهاز المناعي للحيوانات الصغيرة العمر , عدم وجود مناعة واردة من الام بمعايير کافية لمقاومة الاصابة بالممرضات , فضلا عن حساسية الکلاب صغيرة العمر للاصابة.

اظهرت نتائج علاقة نسبة الاصابة بالاوالي الدموية مع جنس الحيوانات حيث تبين ان نسبة الاصابة بالذکور اعلى مما هو عليه بالاناث وبفارق معنوي واضح , وهذا يختلف مع ما ذکره (Gadahi et al., 2008) حيث بين عدم وجود اختلافات معنوية بين الذکور والاناث المصابة بالطفيليات الدموية , في حين اتفقت نتائجنا مع ما توصل اليه (Kalef  and Fadhil, 2013) حيث بينت نتائجه ارتفاعا في نسب الاصابة في الذکور مقارنة بالاناث واعزي السبب في ذلک الى السلوک العدائي والقتالي للذکور حيث يمکن ان تنتقل الاصابة بالعض والتماس المباشر فيما بينها مقارنة بالاناث , او قد يعود سبب الاختلاف بين نسب الاصابة للذکور والاناث في دراستنا قد يعود في الاختلاف في عدد العينات المأخوذة من الحيوانات حيث کانت في الذکور اکبر مما هو عليه في الاناث مما لا يعطي صورة حقيقية عن نسبة الاصابة الفعلية لکلا الجنسين.

تبين من خلال دراسة العلاقة ما بين نسبة الاصابة بالاوالي الدموية بسلالة الکلاب ان نسبة الاصابة کانت مرتفعة في السلالات کبيرة الحجم في حين کانت منخفضة في السلالات صغيرة الحجم وبفارق معنوي واضح , اختلفت هذه النتائج مع ما ذکره (Samradhni, 2002) حين بين عدم وجود اختلافات معنوية ما بين نسبة الاصابة وسلالات الکلاب , ان الاختلاف في نسب الاصابة ما بين السلالات الکبيرة والصغيرة يعود لطبيعة تربية وتواجد السلالات حيث ان السلالات کبيرة الحجم يتم تربيتها خارج المنازل نظرا لطبيعة مهام تربيتها (الحراسة) في حين ان السلالات صغيرة الحجم يتم تربيتها عادة داخل المنازل مما يقلل من تعرضها للنواقل البايولوجية للاوالي الدموية وبالتالي تنخفض نسبة الاصابة فيها (مشاهدات حقلية للباحث).

REFERENCES

المصـــادر

Adaszek, L.; Obara, G.; Piech, T. and Kalionwiski, M. (2016): Possible vertical transmission of Babesia canis canis from a bitch to her puppies case report. Veterinarian.medicinia, 61(5): 263-266.

Arsalan, S.H. (2005): Clinical, haematological and biochemical studies of some blood protozoa in dogs in Ninveh. Iraqui. J. Vet. Sci, 19(1): 63-77.

Aydin, MF.; Sevinc, F. and Sevinc, M. (2015): Molecular detection and characterization of Hepatozoon spp. in dogs from the central part of Turkey. Ticks Tick Borne Dis. 6(3): 388-92.

Baneth, G. and Shkap, V. (2003): Monozonic cysts of Hepatozoon canis. J. Parasitol, 89(1): 3-9.

Barati, A. and Razmi, GR. (2018): A Parasitologic and Molecular Survey of Hepatozoon canis Infection In Stray Dogs In Northeastern Iran. J. parasitol. 104(4): 413-417.

Coles, E.H. (1986): Veterinary clinical pathology. 4^th ed. WB. Sanndar company, Philadelaphia

Duarte, S.C.; Parente, J.A.; Silivia, O.J.; Jayme, V.S. and Linhares, G.F. (2016): Molecular diagnosis of Hepatozoon canis in symptom- atic dogs in the city of Goiania. Goisa, Brazile.

Faraj, A.; Afkar, M. and Al-Amery, A.M. (2015): Prevalence trypanosomiasis of stray dog in Baghdad city, Iraq inter city, Iraq. International Journal of Recent Scientific. Research 6(11): 7206-7208.

Gadahi, A.A.; Arijo, G.; Abubakar, M.; Javaid, S.B. and Arshed, M.J. (2008): Prevalence of Blood parasites in stray and pet Dogs in Hyderabad Area: Comparative sensitivity different Diagnostic techniqes for the detection of microfilaria Veterinary World, Vol.1(8): 229-232.

Hoare, C.A. (1972): The Trypanosomiase of mammals. A zoological

Kalef, D.A. and Ali, I.F. (2013): Incidance of Babesia gibsoni in stray dogs (Iraq). OJVR,17(1):32-35.

Korzh, A.P. and Zadorozhnyaya, V.Y. (2013): The biological characterstics of representatives of the genus Hepatozoon (Apicomplexa), Adeleorina in the marsh frog separate populations of   Zaporizhzhya region. Vestnik zoologii, 47(2): 34-39.

Lan, H.; Xiaoyan, M.; Jinfang, H.; Yuan, H.; Pei, H.J.; Junwei, H.; Long, Y.; Ngabu, M.; Ligang, S. and Junlong, Z. (2017): First  Molecular Detection of Babesia gibsoni in Dogs from Wuhan,  China. Front Microbiol. 8: 1577.

Mahmud, M.A.A.; Belal, S.M. and Uddin, F.M.J. (2014): Prevalence of protozoan disease in pet dogs at district veterinary hospital, Siranj, Bangaldish. Bangl. J. Vet. Med. 12 (2): 191-196.

MICHAŁ, F.; RAFAŁ, S. and WŁODZIMZ, K. (2010): Analysis haematological Abnormalities observe in dogs infected by a large   Babesia Bull Vet Inst Pulawy 54, 167-170.

Saleem, A.H. (2007): A review of confirmed pathogens of dogs and cats Iraq. Bas, J., Vet., Res, 6,(2):156-162.

Samradhni, D.D. (2002): Studies on haemoprotistant infection in canines at Nagpur (Maharashtra). Master thesis, University of Nagpur India.

Soulsby, E.J.L. (1982): Helminths, Arthropods, and Protozoa, of domesticated animals, 7^th edn, ElBS and Bailliere Tindall And Casael Ltd. London.

Youn, K. and Xuenan, X. (2014): New Molecules in Babesia gibsoni and Their Application. for Diagnosis, Vaccine Development, and Drug Discovery. Korean J Parasitol. 52(4): 345–353.